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lhwen182

金虫 (正式写手)

[求助] 修复PCR(reconditioning PCR)

请教一下,修复PCR怎么做?看文献说是将先扩增出的产物稀释10倍,再在新的反应液中进行新的3个循环的修补扩增。
问:这个稀释是直接用灭过的双蒸水稀释么?稀释以后的体系又该怎么配置?50μ的体系稀释后就是500μ了,这个体系该怎么配啊?
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good! 2011-04-28 10:21:13
lhwen182(金币+5): 2011-04-29 13:48:06
lhwen182(金币+10): 2011-05-06 14:49:30
稀释10倍用ddH2O就可以。以稀释后的PCR产物作为模板,PCR体系同原来的体系,再用同程序PCR3个循环。
你可操作的方法是:将PCR产物取1微升,加入9微升的ddH2O,这就是你新的要进行修复PCR的模板,所有东西按照原来的体积加。比如原来DNA模板要加3微升,那么修复PCR的体系中也加入3微升DNA模板(即稀释后的PCR产物)。
不知道我又没有说清楚,若有不明白的,请留言给我哈!
2楼2011-04-28 09:51:43
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lhwen182

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 新人小玥 at 2011-04-28 09:51:43:
稀释10倍用ddH2O就可以。以稀释后的PCR产物作为模板,PCR体系同原来的体系,再用同程序PCR3个循环。
你可操作的方法是:将PCR产物取1微升,加入9微升的ddH2O,这就是你新的要进行修复PCR的模板,所有东西按照原来 ...

恩,谢谢,都清楚了。已经P出来了。
3楼2011-04-29 13:49:14
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