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bla2009

铜虫 (小有名气)

[求助] DNA重组时片段和载体的比例怎么算？

做DNA重组的时候，大家用的片段和载体的比例都是多少呀？

用分光光度计测得的浓度是ng/ul的，怎么换算到 mol 呢？

还是大家都凭经验不测OD直接配体系呢？
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等笨笨
1楼 2011-04-25 13:22:37
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-04-25 15:54:36
bla2009(金币+1): 2011-04-28 14:39:51
bla2009(金币+1): 2011-05-04 23:20:47
大致用载体和片段的浓度（ng）分别除以二者的大小（bp）就可以了，再算二者的比值就是最终的比例了，不需要先转化为mol.
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-04-25 14:15:35
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david_xmu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): 很好 很认真 2011-04-25 15:54:50
引用回帖:
Originally posted by bla2009 at 2011-04-25 13:22:37:
做DNA重组的时候，大家用的片段和载体的比例都是多少呀？

用分光光度计测得的浓度是ng/ul的，怎么换算到 mol 呢？

还是大家都凭经验不测OD直接配体系呢？

我这里有个图片，里面有核酸摩尔数和微克之间的换算，希望对楼主有用。
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3楼2011-04-25 14:39:02
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erosionsdd

禁虫 (小有名气)
bla2009(金币+1): 2011-04-28 14:40:05
bla2009(金币+1): 2011-05-06 00:12:03
本帖内容被屏蔽
4楼2011-04-27 10:48:21
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kwkw

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:36:33
没计算过，大概差不多就可以，片段多点，载体少点。
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再苦：也别忘记坚持！再烦：也别忘记微笑！再急：也要注意语气！再累：也要爱自己！低调做人，你会一次比一次稳健。高调做事，你会一次比一次优秀！
5楼2011-04-28 17:35:09
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-29 08:44:34
bla2009(金币+1): 2011-04-29 15:38:56
bla2009(金币+1): 2011-05-04 23:21:01
总体来说，DNA片段和载体的比是1:3-1:10你可以在重组之前把DNA片段和载体跑一下电泳（跑电泳时两者要加入同等量），根据电泳图这两者的厚度大概判断一下加入量的多少。举个例子，如果电泳图两者厚度相当，则直接DNA片段加入量是载体的3到10倍就可以了。
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学习....
6楼2011-04-28 19:08:28
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匿名

用户注销 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-29 08:44:47
bla2009(金币+1): 2011-04-29 15:39:21
bla2009(金币+1): 2011-05-04 23:21:11
bla2009(金币+1): 2011-05-05 15:38:17
本帖仅楼主可见
赞一下
7楼2011-04-28 22:03:58
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