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求，原核表达相关问题？
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各位大侠： 我的目的基因和表达载体pet-41a不知道为什么连接不上？ 我已验证不是感受态，连接酶的问题 另外，酶切回收后也跑了电泳，条带虽不是太亮，但感觉还可以 阳性也可以做出来 请各位指教！！！ [ Last edited by dhd997 on 2011-4-24 at 08:40 ] |
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关于原核表达中，IPTG,KAN等的配制和最终工作浓度问题！！！
已经有16人回复- 原核表达SDS-PAGE问题
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10楼2011-04-26 22:24:32
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
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2楼2011-04-23 21:54:39
roomofxw
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+3): good 2011-04-24 09:56:59
475502411(金币+4): 2011-04-27 15:02:10
475502411(金币+6): 2011-05-01 10:26:37
西瓜(金币+3): good 2011-04-24 09:56:59
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475502411(金币+6): 2011-05-01 10:26:37
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要是确认不是连接，转化过程的问题 请设计实验，验证 1.质粒上多克隆位点是否正确，能不能酶切开，这可以通过分别单酶切，测序来验证 2.引物设计是否有问题，或者是否合成引物有问题，酶切位点没有了。 3.验证方法是否合适，仅仅是菌落PCR是不可以的。 但是若是，PCR产物连接到T载体上，再酶切下来，载体的酶切也没有问题…… 咕~~(╯﹏╰)b |
3楼2011-04-24 09:12:47
4楼2011-04-26 19:56:05