[求助] 求，原核表达相关问题？

Originally posted by 西瓜 at 2011-04-23 21:54:39:
最好把实验步骤说详细些吧。比如你的连接体系和反应条件是怎么样的？

Originally posted by roomofxw at 2011-04-24 09:12:47:
要是确认不是连接，转化过程的问题
请设计实验，验证
1.质粒上多克隆位点是否正确，能不能酶切开，这可以通过分别单酶切，测序来验证
2.引物设计是否有问题，或者是否合成引物有问题，酶切位点没有了。
3.验证 ...

Originally posted by jlc0225 at 2011-04-26 20:21:57:
别急，有些实验是永远不知道为什么出了问题，但是突然间一切都会顺利。着急只会使思路更乱。

如果你的问题确定在连接上，那么就要把有关连接的因素一一找出来。有时要重新配置或更换试剂，酶的生产厂家可以更换 ...

Originally posted by roomofxw at 2011-04-26 21:41:07:
1.你指的连接不上，是指平板没有菌，还是都是自连
2.想验证你的连接体系，你就拿别人的质粒和片段连一下试一试。或者把质粒，但单酶切后再连。
3.转的什么感受态
4.你的目的基因代表的蛋白，会对e.coli产生 ...

Originally posted by zhangyonghu at 2011-04-26 22:42:30:
你看看是不是片段太大啊/?
还是你的酶不是很适合啊 ？