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艾滋病癌症

银虫 (小有名气)

[求助] 急!!像这样的pcr结果怎么优化啊

本人因为毕业设计的缘故“被选择”了从未涉足的分子生物学方向,很多经验是恶补不来的。今天跑出了如下图的结果,师兄让优化一下但我小白一个,不太清楚从哪里入手。求指导

PS:marker是2000 的,750处是目的条带,它前面的三条比较纠结
我是50体系的,buffer5,dntp4,上下引物各2,模板1,酶0.5
合成单上的TM上71,下75
我用65度退火(60度也试过,效果不大)1分钟。30个循环

我想知道我目的条带前面的那三条分别是什么东西,怎么优化。如果告诉我用退火温度跑个梯度出来,是不行的哦


[ Last edited by 艾滋病癌症 on 2011-4-22 at 13:41 ]
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欲善其事,必先利其器
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艾滋病癌症

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xukewei at 2011-04-22 15:55:32:
优化的话提高退火温度,减少退火和延伸时间,或做降落PCR
但你这种情况根本不需要,割胶后再跑个电泳图不就可以了啊

恩恩,这是一个不错的办法,受教了
欲善其事,必先利其器
12楼2011-04-22 17:02:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 我也是啊 哈哈 哈哈 2011-04-22 17:52:20
要是我p成这样,会直接切胶回收的。有优化的时间,克隆都做好了。
PS:教坏小孩子了
Thank-you,so-blue.
2楼2011-04-22 14:02:06
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艾滋病癌症

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-22 14:02:06:
要是我p成这样,会直接切胶回收的。有优化的时间,克隆都做好了。
PS:教坏小孩子了

嘿嘿嘿,已经如你所说啦
但是总得要搞一个漂亮的图吧
欲善其事,必先利其器
3楼2011-04-22 14:17:47
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个有必要优化吗?这种图都不上的,直接切胶回收做克隆测序就行了
在等待中涅槃重生
4楼2011-04-22 14:34:50
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