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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态的制备及转化？
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 牛人出手咯 2011-04-22 22:03:09
1、考虑菌株的活力怎么样，是不是放在-40太久，活力下降
2、感受态制备的时候，没有加甘油？应该加甘油的，-80保存，不加甘油的话，保存不了几天的。
3、热激之后，冰浴2-3min即可。
4、可以尝试，涂板前，可4000rpm离心3-5min，在洁净台中弃掉800-900上清，移液器轻轻吹匀沉淀，全部涂板
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
11楼2011-04-22 21:33:46
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niuniu2010

铜虫 (初入文坛)
转化时我做了两个对照，将两管感受态分别涂到加Amp和不加Amp的LB平板上，加Amp的平板无单克隆，不加Amp的平板有单克隆，这是不是就可以说明感受态没受到污染。
我之前按照这个方法做都很成功，这两次都不行。
实验室这几天没液氮了，我在想是不是我储存感受态时没在液氮里冻一下呢？
即使没在液氮里冻，但也不至于一个单克隆也没吧。
我每次感受态做的都不多，四天之内都用了，所以就没加甘油。
是不是质粒在-20℃的太长了影响的呀？
赞一下 回复此楼
12楼2011-04-23 08:26:40
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风车少年

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
41065楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-22 19:55:45
1、楼主培养细胞的时候转接培养三次，引入受污染隐患。
2、楼主没有试过用氯化镁处理。
3、感受态细胞分装到EP管中的时候，EP管要预冷，分装好之后要放在冰中，一直到放到冰箱里保存都不该升温。
4、感受态保存所 ...

我想问下，第二条中 氯化镁  是40%氯化镁溶液吗？
【40%氯化镁溶液 氯化镁孔雀绿增菌液配套试剂】就是这个吗？
这个怎么配置呢？谢谢！
赞一下 回复此楼
13楼2013-01-29 16:50:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
1597245楼: Originally posted by 风车少年 at 2013-01-29 16:50:15
我想问下，第二条中 氯化镁  是40%氯化镁溶液吗？
【40%氯化镁溶液 氯化镁孔雀绿增菌液配套试剂】就是这个吗？
这个怎么配置呢？谢谢！...

太久不做，忘记了，笔记本也不在手上，不好意思。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2013-01-29 23:10:52
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