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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 牛人出手咯 2011-04-22 22:03:09
1、考虑菌株的活力怎么样,是不是放在-40太久,活力下降
2、感受态制备的时候,没有加甘油?应该加甘油的,-80保存,不加甘油的话,保存不了几天的。
3、热激之后,冰浴2-3min即可。
4、可以尝试,涂板前,可4000rpm离心3-5min,在洁净台中弃掉800-900上清,移液器轻轻吹匀沉淀,全部涂板
千万不要因为走的太久,而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
11楼2011-04-22 21:33:46
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niuniu2010

铜虫 (初入文坛)

转化时我做了两个对照,将两管感受态分别涂到加Amp和不加Amp的LB平板上,加Amp的平板无单克隆,不加Amp的平板有单克隆,这是不是就可以说明感受态没受到污染。
我之前按照这个方法做都很成功,这两次都不行。
实验室这几天没液氮了,我在想是不是我储存感受态时没在液氮里冻一下呢?
即使没在液氮里冻,但也不至于一个单克隆也没吧。
我每次感受态做的都不多,四天之内都用了,所以就没加甘油。
是不是质粒在-20℃的太长了影响的呀?
12楼2011-04-23 08:26:40
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风车少年

木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
41065楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-22 19:55:45
1、楼主培养细胞的时候转接培养三次,引入受污染隐患。
2、楼主没有试过用氯化镁处理。
3、感受态细胞分装到EP管中的时候,EP管要预冷,分装好之后要放在冰中,一直到放到冰箱里保存都不该升温。
4、感受态保存所 ...

我想问下,第二条中 氯化镁  是40%氯化镁溶液吗?
【40%氯化镁溶液 氯化镁孔雀绿增菌液配套试剂】就是这个吗?
这个怎么配置呢?谢谢!
13楼2013-01-29 16:50:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
1597245楼: Originally posted by 风车少年 at 2013-01-29 16:50:15
我想问下,第二条中 氯化镁  是40%氯化镁溶液吗?
【40%氯化镁溶液 氯化镁孔雀绿增菌液配套试剂】就是这个吗?
这个怎么配置呢?谢谢!...

太久不做,忘记了,笔记本也不在手上,不好意思。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2013-01-29 23:10:52
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