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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 线性化及完整的质粒电泳问题。
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111602

木虫 (著名写手)

[交流] 线性化及完整的质粒电泳问题。 已有8人参与

最近在做实验过程中，遇到要将质粒先线性化，发现用酶切后电泳，与未酶切的质粒相比，跑的速度要快，不知是何原因，这些质粒都非空载，有些不理解，一般线性后跑的速度应该比超螺旋快才对啊。请高手指教！

首先感谢各位的讨论和建议。但必须说明一点，这个质粒是重组的，而且选择的酶只有一个酶切位点，电泳用的是1% AGAROSE GEL. 120V  30MIN.并且可以肯定已经被线性化的了。因为后继实验如果没有被线性化是无法成功的。


大家的回答都是建立在理论分析基础上的。我也赞同这一理论，但不知道有没有真正做过这一实验的朋友，可能我的实验（电泳）出了问题，但希望有实践经验的朋友给点意见。

[ Last edited by 111602 on 2011-4-21 at 01:42 ]
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1楼 2011-04-20 08:28:01
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主
★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎经验交流 2011-04-22 09:13:33
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-20 11:13:31:
我刚才去请教实验室诸位高手，大家一致认为开环跑的最慢，其实是线性，最快的是超螺旋，哎。。。学艺不精啊。。。。不好意思啊。见谅！

我说的那本书上面有提到，可能我把意思没有搞清楚。。。。
再次不好 ...

呵呵，知错能改，就有进步呀！

超螺旋比较紧蹙，阻力小多了。是最快的。

这也是为什么我们跑质粒电泳，好的会发现三条带的原因啦~
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
13楼2011-04-20 13:51:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 有道理 2011-04-20 09:38:50
线性化以后应该跑的慢吧？应该比环状的大一些
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-04-20 09:02:49
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111602

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-20 09:02:49:
线性化以后应该跑的慢吧？应该比环状的大一些

这个可未必，也看到好多人反映这个问题。不知道有实际做过的没有。
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3楼2011-04-20 09:14:00
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-20 10:45:50
引用回帖:
Originally posted by 111602 at 2011-04-20 09:14:00:
这个可未必，也看到好多人反映这个问题。不知道有实际做过的没有。

什么叫未必如此？
质粒一般有三种状态，线性质粒；开环的；超螺旋的；一般前以最快的是超螺旋，其次是开环的，然后才是线性的。
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-20 10:05:43
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