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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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starfishfly

铜虫 (初入文坛)

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Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 12:07:46:
不要无限的去延长酶切时间,任何限制性内切酶酶切时间久了都会出现星活性,在不该酶切的位置出现了非特异性切割,一般切2h就够了

我是切基因组DNA的,一直切不断,只好延长时间了的。
如果出现星活性的话,应该是条带增多吧,我跑出来的电泳图谱是  时间短的更弥散 同一管酶切,不同时间取样的
11楼2011-04-14 12:24:27
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-14 12:15:34:
同一个体系的意思,是说里面各种成分的浓度一样。大体系、小体系,并不是说浓度不一样,而是说总的反应规模的大小。

大体系酶切,是因为酶切之后往往做胶回收等纯化,中间DNA损失比较多。所以开始切的DNA的量 ...

长见识了,呵呵
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
12楼2011-04-14 12:46:35
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by starfishfly at 2011-04-14 12:24:27:
我是切基因组DNA的,一直切不断,只好延长时间了的。
如果出现星活性的话,应该是条带增多吧,我跑出来的电泳图谱是  时间短的更弥散 同一管酶切,不同时间取样的

能跟我透漏下你切基因组DNA做什么实验吗?
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
13楼2011-04-14 12:48:30
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starfishfly

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 12:48:30:
能跟我透漏下你切基因组DNA做什么实验吗?

是做subclone的~
我开始切了一批筛到的重组体是假阳性的,因为那时候切的效果不好,DNA很多都没切出来。前天切的本来挺好的,但酶连电转后什么都没长……我昨天又切,就多加了5ul的DNA就根本一点也切不开了。
14楼2011-04-14 13:00:38
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think-edge

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
原来在这里可以学到这么多东西啊  真是的现在才发现呀 晚了点
15楼2012-08-29 14:45:30
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