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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】定点突变方法突变位点的确定
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xuemei1984

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1楼 2011-04-13 13:33:19
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
xuemei1984(金币+2): 谢谢 2011-04-13 17:55:27
dhd997(金币+2): good 2011-04-14 09:32:15
xuemei1984(金币+1): 2011-06-29 17:36:26
引用回帖:
Originally posted by xuemei1984 at 2011-04-13 13:33:19:
求助定点突变，原序列中将要突变的位点碱基为AGGA，四个碱基全部突变，突变的序列应该是什么？是四个碱基必须全部颠换，还是要根据GC含量确定？

突变后的序列你不知道吗？那我的问题是你为什么选择在这个位点做突变，如果只是想删掉这四个碱基，那两对引物就可以搞定，如果是想让它突变后引入其他的功能（比如可以翻译成其他的氨基酸），那就把序列改成想要的氨基酸所对应的序列
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2楼2011-04-13 13:41:45
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
xuemei1984(金币+1): 谢谢 2011-04-13 17:55:38
dhd997(金币+2): 有道理 2011-04-14 09:32:30
xuemei1984(金币+1): 2011-06-29 17:36:19
你为什么要做定点突变，做之前最好先要弄清楚你的实验目的。
连WHY都不知道，谈不上怎么去How。
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3楼2011-04-13 14:03:44
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xuemei1984

禁虫 (小有名气)
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4楼2011-04-13 14:15:23
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xuemei1984

禁虫 (小有名气)
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5楼2011-04-13 14:58:12
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
xuemei1984(金币+1): 2011-06-29 17:36:07
引用回帖:
Originally posted by xuemei1984 at 2011-04-13 14:58:12:
突变的位点是转录因子的结合位点，不牵扯氨基酸序列，那应该是置换掉还是删除呢？谢谢

那你为什么要在这个地方做突变？为什么不在其他地方呢？
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6楼2011-04-13 15:51:10
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xuemei1984

禁虫 (小有名气)
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7楼2011-04-13 17:51:52
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csdyg

木虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-14 09:32:49
xuemei1984(金币+1): 谢谢 2011-04-14 16:20:56
xuemei1984(金币+1): 2011-06-29 17:36:01
看起来楼主好像是在做有关转录修饰方面的工作，这种情况下一般需要位点删除突变，可以设计突变引物删除掉这4个核苷酸位点
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8楼2011-04-14 02:45:38
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
我觉得如果删除这四个碱基对你后续的研究没什么影响的话那就干脆删掉，省得因为你设计的突变序列不合适产生其他的不良影响。还是去争求一下你导师的意见吧
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9楼2011-04-14 09:21:55
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