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liucaifeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】诚心请教一个关于拟南芥突变体鉴定的问题已有8人参与

订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体,DNA水平鉴定有纯合子,但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达,几个Line 都是这样,快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况,可能是什么愿意导致的呢?
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

★ ★
jhu132llh(金币+2): good,鼓励热心虫友积极参与讨论 2011-11-07 18:04:35
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11楼: Originally posted by 叶寻 at 2011-11-06 14:35:44:
请问一下呀?我的重新设计引物后,RT-PCR结果,突变体的目的条带明显比野生型的弱,这样是不是可以继续。或者还需要什么进一步的验证吗?
  多谢指教!

你的突变体T-DNA是插在启动子还是基因的外显子或内含子啊?我的一个插在外显子,也是鉴定结果目的基因表达较弱,不知道怎么解释
12楼2011-11-07 15:47:12
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咸鱼

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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Originally posted by liucaifeng at 2011-04-07 20:36:30:
订的SALK库的拟南芥T-DNA插入突变体,DNA水平鉴定有纯合子,但RNA水平鉴定目的基因却仍能表达,几个Line 都是这样,快郁闷了。不知道大家有碰到过类似情况,可能是什么愿意导致的呢?

RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧,这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列?
2楼2011-04-10 13:06:53
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

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Originally posted by 咸鱼 at 2011-04-10 13:06:53:
RNA水平鉴定就是做RT或者NOrthern吧,这样的话你选择做PCR的那一段引物或Northern的那一段探针是T-DNA插入之前还是之后的序列?

做RT,PCR引物设计的还是跨T-DNA的,按理说不该P出来的,可就是能P吃条带来,测序结果也表明的确是目的条带
3楼2011-04-11 10:11:45
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咸鱼

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liucaifeng at 2011-04-11 10:11:45:
做RT,PCR引物设计的还是跨T-DNA的,按理说不该P出来的,可就是能P吃条带来,测序结果也表明的确是目的条带

那是不是DNA检测出了什么差错?
4楼2011-04-12 19:52:25
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