应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】质粒的单链处理
61/1返回列表
查看: 900  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

由田120516

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒的单链处理

有没有做过基因敲除的朋友，在处理自杀质粒时用过这个方法：取2ug自杀质粒溶于20uL0.2mo1/L NaOH溶液中(含0.2mmo1/L,EDTA),  37度孵育30min。加入2ul乙酸钠(3mo1/L,  PH 4.8),  80ul无水乙醇，-70 度沉淀质粒DNA,  70%乙醇洗涤沉淀两次，真空干燥。而后溶于10ul灭菌去离子水中，冰浴2小时，-20 度保存备用。
如果有，我想请教一下，在用NaOH处理后，是否需要离心收集沉淀，再加乙酸钠，还是不离心，直接加？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-03-31 08:53:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
一般加乙酸钠的体积是1/10，你这个protocol 恰好也是1/10.
赞一下 回复此楼
2楼2011-03-31 09:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

由田120516

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-31 09:05:36:
一般加乙酸钠的体积是1/10，你这个protocol 恰好也是1/10.

朋友，我知道要加乙酸钠，你再看看问题，我问的不是加不加，而是怎么加
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-31 09:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by 由田120516 at 2011-03-31 09:25:09:
朋友，我知道要加乙酸钠，你再看看问题，我问的不是加不加，而是怎么加

1/10体积加当然是不离心啊。
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-31 09:40:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

由田120516

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-31 09:40:38:
1/10体积加当然是不离心啊。

那我能得到单链质粒吗？酸和碱中和，不就使质粒复性了吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-31 10:10:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
由田120516(金币+1): 2011-03-31 11:04:35
由田120516(金币+9): 2011-03-31 11:05:14
引用回帖:
Originally posted by 由田120516 at 2011-03-31 10:10:44:
那我能得到单链质粒吗？酸和碱中和，不就使质粒复性了吗？

呵呵，你多虑了。测序时制备单链DNA就是这么干的。
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-31 10:33:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 由田120516 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭