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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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由田120516

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】质粒的单链处理

有没有做过基因敲除的朋友,在处理自杀质粒时用过这个方法:取2ug自杀质粒溶于20uL0.2mo1/L NaOH溶液中(含0.2mmo1/L,EDTA),  37度孵育30min。加入2ul乙酸钠(3mo1/L,  PH 4.8),  80ul无水乙醇,-70 度沉淀质粒DNA,  70%乙醇洗涤沉淀两次,真空干燥。而后溶于10ul灭菌去离子水中,冰浴2小时,-20 度保存备用。
如果有,我想请教一下,在用NaOH处理后,是否需要离心收集沉淀,再加乙酸钠,还是不离心,直接加?谢谢
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一般加乙酸钠的体积是1/10,你这个protocol 恰好也是1/10.
2楼2011-03-31 09:05:36
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由田120516

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-31 09:05:36:
一般加乙酸钠的体积是1/10,你这个protocol 恰好也是1/10.

朋友,我知道要加乙酸钠,你再看看问题,我问的不是加不加,而是怎么加
3楼2011-03-31 09:25:09
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引用回帖:
Originally posted by 由田120516 at 2011-03-31 09:25:09:
朋友,我知道要加乙酸钠,你再看看问题,我问的不是加不加,而是怎么加

1/10体积加当然是不离心啊。
4楼2011-03-31 09:40:38
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由田120516

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-31 09:40:38:
1/10体积加当然是不离心啊。

那我能得到单链质粒吗?酸和碱中和,不就使质粒复性了吗?
5楼2011-03-31 10:10:44
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由田120516(金币+1): 2011-03-31 11:04:35
由田120516(金币+9): 2011-03-31 11:05:14
引用回帖:
Originally posted by 由田120516 at 2011-03-31 10:10:44:
那我能得到单链质粒吗?酸和碱中和,不就使质粒复性了吗?

呵呵,你多虑了。测序时制备单链DNA就是这么干的。
6楼2011-03-31 10:33:46
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