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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】匀浆液Tris-HCl的配制
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liliinjn

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】匀浆液Tris-HCl的配制 已有3人参与

提取蛋白用的 查资料都是用的(50mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,10mmol/L EDTA,10mmol/L Vc) 进行匀浆,
原本以为配好50mmol/L Tris-HCl,pH 7.4的溶液再算好需要的EDTA 和Vc的量加进去溶解了就好了 结果测了一下发现pH发生了巨大的改变才意识到不是这么回事，
查了一晚上，貌似是类似裂解液或DNA提取液的配制方法，可是我找不到相关资料，求有懂的人指导一下啊，要疯了、、、、
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1楼 2011-03-29 20:59:13
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65900931

银虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+2): 感谢分享经验 2011-03-29 22:59:45
Tris-HCl 都是配成1M的储存液，然后再根据需要稀释。
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2楼2011-03-29 21:05:18
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 65900931 at 2011-03-29 21:05:18:
Tris-HCl 都是配成1M的储存液，然后再根据需要稀释。

能不能详细说一下 我也看到有说用母液稀释之类的 可是具体怎么做不清楚呢
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3楼2011-03-29 21:11:27
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65900931

银虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+2): 热心 2011-03-29 23:00:00
称取一定量（自己计算）Tris 固体，溶于水中，充分溶解后，在室温下（25度），将pH计探头插入溶液中，同时用磁力搅拌机搅拌溶液。慢慢加入浓盐酸，使pH到达7.4左右。定容，再测一次pH。高压灭菌。恢复至室温后再测一次pH。母液配制完毕。
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4楼2011-03-29 22:44:31
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 65900931 at 2011-03-29 22:44:31:
称取一定量（自己计算）Tris 固体，溶于水中，充分溶解后，在室温下（25度），将pH计探头插入溶液中，同时用磁力搅拌机搅拌溶液。慢慢加入浓盐酸，使pH到达7.4左右。定容，再测一次pH。高压灭菌。恢复至室温后再测 ...

谢谢！我能不能问一下为什么要灭菌？ 关于配制昨天问到了我一直搞不明白的点， 所谓Tris-HCl的浓度指的是Tris的浓度，先配好Tris,加入其它物质，然后用浓盐酸调到合适的pH定容就可以了
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5楼2011-03-30 09:03:58
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65900931

银虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-30 09:53:13
所谓母液都是要长期存放的，所以要灭菌，不然过一段时间就长菌了。如果你不长期存放就不用灭菌。
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6楼2011-03-30 09:32:11
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 65900931 at 2011-03-30 09:32:11:
所谓母液都是要长期存放的，所以要灭菌，不然过一段时间就长菌了。如果你不长期存放就不用灭菌。

哦 这样啊 谢谢！
还有一个问题 今天试着配了一下 试剂都加进去还没用盐酸调PH测了一下，PH值已经低于我要的了，这可怎么解决啊、、、、、、
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7楼2011-03-30 12:40:11
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65900931

银虫 (小有名气)
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Tris溶于水是呈碱性的，不懂你怎么做的，你还是找个师兄指导一下吧。
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8楼2011-03-30 13:03:53
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 65900931 at 2011-03-30 13:03:53:
Tris溶于水是呈碱性的，不懂你怎么做的，你还是找个师兄指导一下吧。

我加了其他物质 呵呵 还是要谢谢你的回答！
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9楼2011-03-30 13:27:34
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Nancy1988

银虫 (小有名气)
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VC是酸性的呀，会改变pH吧
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10楼2012-06-25 23:53:02
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