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cowboy1868

禁虫 (小有名气)
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1楼 2011-03-29 13:56:11
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genomelin

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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-03-29 19:34:09
处理的时候无论你提的如何，都要用DNase消化处理的，再往下做反转
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2楼2011-03-29 14:54:07
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genomelin

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Originally posted by szylnl at 2011-03-29 15:15:45:
RNA有降解，有没有DNA污染， 从胶上看的不准，你可以用一个以前P出结果的引物，以RNA为模板做一下PCR，如果P出来的 则证明没有DNA污染，

这个是降解吗？？我记得菌类的就是这样的吧，毕竟是组织，5S很难弄的很干净的
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9楼2011-03-29 20:14:00
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genomelin

银虫 (小有名气)
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Originally posted by cowboy1868 at 2011-03-29 16:48:40:
那请问你用的什么牌子的DNase？谢谢

New England
我们一般用Trizol+invitrogen 的kit，在第二次洗脱的时候加DNase
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10楼2011-03-29 20:15:44
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genomelin

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Originally posted by szylnl at 2011-03-29 22:11:17:
那按你说的，5S很难弄干净，咱们不考虑这个问题，但是很明显，尤其是左边的那个28s和18s，几乎一样亮，这就说明了，RNA有部分降解，但是右边那个要好一些。

右边的样品比较清晰，能看出来28S大概是18S的两倍
但是左边的RNA样品明显上多了，这种条件下无法判断具体的质量的，但是参考背景等，感觉效果和右面的差不多
另外一样亮不能绝对说明什么问题的（并非所有物种都是28S：18S=2:1），我们在做RNA-seq的时候胶图只是参考，因为其中的影响因素较多，一般都要用bioanalyzer去检测RNA的质量的
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13楼2011-03-30 18:02:23
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genomelin

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Originally posted by cowboy1868 at 2011-03-29 20:22:53:
请问您是第二次用酒精洗脱时加的DNA酶吗？谢谢..

恩，好像是第二次洗脱前，加DNase，静置几分钟（按照说明），然后加洗脱液洗脱
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14楼2011-03-30 18:03:35
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