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heartear1

银虫 (小有名气)

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PI双染？爬片？悬浮了咋办？已有1人参与

用的是昆虫Sf9细胞，爬片，然后诱导凋亡，再用Hoechst/PI双染检测。
昨天做好了protocol（先染色再固定的），今天一想觉着不对啊，贴壁细胞发生凋亡的过程中如果悬浮了，那在染色等等的过程中吸尽液体时也会将悬浮的凋亡细胞吸走的。
难道要在染色后先用细胞刮或者胰酶消化让细胞全悬浮了？再离心？再固定？或者直接在诱导凋亡后让细胞各种悬浮然后直接当悬浮细胞处理？
别跟我说用流式。

顺便把染色过程的protocol 贴上来大家帮我修改下（这个是参考别人的，先染色后固定，如果有不对的地方见笑了）

（1）向细胞中加入Hoechst33342染色液，至终浓度为10μg/ml，37℃反应20min
（2）继续加入PI染色液，至终浓度为10μg/ml，4℃反应20min
（3）直接加入4％多聚甲醛固定液，与培养液按1：3混合，使多聚甲醛的终浓度为1%，固定细胞10min。
（4）用PBS洗两遍，每次3分钟。
（5）滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片。
（6）用荧光显微镜观察。

[ Last edited by heartear1 on 2011-3-10 at 11:19 ]

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