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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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heartear1

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】贴壁细胞凋亡后如何做Hoechst/PI双染?爬片?悬浮了咋办? 已有1人参与

用的是昆虫Sf9细胞,爬片,然后诱导凋亡,再用Hoechst/PI双染检测。
昨天做好了protocol(先染色再固定的),今天一想觉着不对啊,贴壁细胞发生凋亡的过程中如果悬浮了,那在染色等等的过程中吸尽液体时也会将悬浮的凋亡细胞吸走的。
难道要在染色后先用细胞刮或者胰酶消化让细胞全悬浮了?再离心?再固定?或者直接在诱导凋亡后让细胞各种悬浮然后直接当悬浮细胞处理?
别跟我说用流式。


顺便把染色过程的protocol 贴上来 大家帮我修改下 (这个是参考别人的,先染色后固定,如果有不对的地方见笑了)

(1)向细胞中加入Hoechst33342染色液,至终浓度为10μg/ml,37℃反应20min
(2)继续加入PI染色液,至终浓度为10μg/ml,4℃反应20min
(3)直接加入4%多聚甲醛固定液,与培养液按1:3混合,使多聚甲醛的终浓度为1%,固定细胞10min。
(4)用PBS洗两遍,每次3分钟。
(5)滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片。
(6)用荧光显微镜观察。

[ Last edited by heartear1 on 2011-3-10 at 11:19 ]
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资源昆虫
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heartear1

银虫 (小有名气)

2楼2011-03-10 14:55:31
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heartear1

银虫 (小有名气)

谁来帮帮我呀

3楼2011-03-10 21:12:16
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