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天鸟木虫 (正式写手)
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[交流]
【交流】有机污染物降解菌的筛选方法讨论 已有7人参与
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我最近也是做有机污染物降解菌的筛选 首先我想讲一下基本的筛选过程 首先我觉得有机物污染物需要用助溶剂溶解它，像丙酮，等。实验的时候，我觉得你最好是先将瓶子灭菌后，再加入丙酮和PCBs的混合液，静止后，待丙酮挥发后，再加入你的无机盐培养基（丙酮挥发的过程，可以放在超净台中挥发，或者是用胶塞塞住后，拿在摇床中摇段时间就会挥发掉丙酮。）然后加入泥样 需要注意的是 1，培养基中的水最好使用的是超纯水，因为普通的水，里面极有可能会里面含有有机物，从而影响后面的实验过程。 2，瓶子最好要保证没有有机物在里面，因为这会影响是不是菌利用的就是 你要的那种有机污染物。 现在其实我也碰到个问题就是我在分菌的时候，其实基本是按照我自己上述说的过程去进行的，但是后面分的菌，居然会在对照中（加入等量的助溶剂其中不含我的要的有机污染物，挥发完助溶剂后后，再加培养基）有些菌会生长。有些在对照会长，有些在对照比实验组长的更好。这些结果很费解。我现在主要认为是外界碳源对于实验造成的影响。大家有没有碰到类似的问题呢，希望大家积极讨论呀！ 说明的是我的菌已经经过纯化了，是纯菌，只不过没有鉴定而已 最近得出的结论是我试验很可能是由于助溶剂甲苯只是分析纯的，不是HPLC级别的，使得分析纯的甲苯可能含有些杂志有机物，使得菌能在对照长 [ Last edited by 天鸟 on 2011-3-16 at 17:24 ] |
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天鸟
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4楼2011-03-10 14:47:11
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我对楼主的过程表示深深的怀疑 你干嘛要等丙酮挥发了才加无机盐？这样得灭多少瓶子啊，而且挥发之后你的有机物在瓶子里是什么状态？加入无机盐之后会溶么？ 实验中用超纯水，哪有那么多钱，咱又不是政府，正常的去离子水完全可行，要是有菌能生长，肯定牛了，你不用做PCB降解了，直接做"菌非人类，不吃万岁"的研究了 筛菌在试管中进行没什么意义，难道筛厌氧菌？可能塑料试管的成分为菌提供了碳源都没准。 你既然已经纯化了菌，还有做对照的意义？只要循环几次活化好菌就行了，做你的降解去 还有，我觉得楼主可能是担心丙酮本身可能做菌的碳源而费尽周折，没事的，咱只是稍稍停留，马上就挥走  |
5楼2011-03-10 15:37:11
shishunyan
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