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天鸟

木虫 (正式写手)

[交流] 【交流】有机污染物降解菌的筛选方法讨论 已有7人参与

我最近也是做有机污染物降解菌的筛选
首先我想讲一下基本的筛选过程
   首先我觉得有机物污染物需要用助溶剂溶解它,像丙酮,等。实验的时候,我觉得你最好是先将瓶子灭菌后,再加入丙酮和PCBs的混合液,静止后,待丙酮挥发后,再加入你的无机盐培养基(丙酮挥发的过程,可以放在超净台中挥发,或者是用胶塞塞住后,拿在摇床中摇段时间就会挥发掉丙酮。)然后加入泥样
   需要注意的是
   1,培养基中的水最好使用的是超纯水,因为普通的水,里面极有可能会里面含有有机物,从而影响后面的实验过程。
   2,瓶子最好要保证没有有机物在里面,因为这会影响是不是菌利用的就是 你要的那种有机污染物。
      现在其实我也碰到个问题就是我在分菌的时候,其实基本是按照我自己上述说的过程去进行的,但是后面分的菌,居然会在对照中(加入等量的助溶剂其中不含我的要的有机污染物,挥发完助溶剂后后,再加培养基)有些菌会生长。有些在对照会长,有些在对照比实验组长的更好。这些结果很费解。我现在主要认为是外界碳源对于实验造成的影响。大家有没有碰到类似的问题呢,希望大家积极讨论呀!


说明的是我的菌已经经过纯化了,是纯菌,只不过没有鉴定而已



最近得出的结论是我试验很可能是由于助溶剂甲苯只是分析纯的,不是HPLC级别的,使得分析纯的甲苯可能含有些杂志有机物,使得菌能在对照长

[ Last edited by 天鸟 on 2011-3-16 at 17:24 ]
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天鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xiaoma0556 at 2011-03-10 15:37:11:
我对楼主的过程表示深深的怀疑
你干嘛要等丙酮挥发了才加无机盐?这样得灭多少瓶子啊,而且挥发之后你的有机物在瓶子里是什么状态?加入无机盐之后会溶么?
实验中用超纯水,哪有那么多钱,咱又不是政府,正常的 ...

谢谢你的意见,我也是第一次做关于有机污染物降解菌的筛选,所以很多地方只是自己的想法。你分出了什么有机污染物的降解菌呀?多交流
我一开始是在试管里进行的原因是这样可以批量进行,要是直接就用瓶子来养的话,肯定很费东西。至于挥发丙酮的原因,确实是基于丙酮留在瓶子里,菌万一利用的是丙酮,而不是你要降解的污染物,那就比较麻烦。谢谢你的意见。

[ Last edited by 天鸟 on 2011-3-10 at 21:37 ]
快乐生活,我快乐
7楼2011-03-10 21:33:58
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郝钊

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-03-10 13:12:59
你表达的有点让人费解,不过大体上能理解。你筛选到得菌株都已经纯化过了吗?如果是混合培养的话,很正常,是共生的结果。另外,你筛选到所谓的污染物降解菌株后经过多少次复筛?是不是其本身就可以在无机盐培养基中生长,实验组有污染物的存在反而影响了生长,才出现了对照比实验组长的好的情况。
愚见,仅供参考。
2楼2011-03-10 12:42:08
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cjl2fl

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要接种,传代2-3次才行的吧?,最好是纯种
3楼2011-03-10 13:14:39
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天鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-03-10 12:42:08:
你表达的有点让人费解,不过大体上能理解。你筛选到得菌株都已经纯化过了吗?如果是混合培养的话,很正常,是共生的结果。另外,你筛选到所谓的污染物降解菌株后经过多少次复筛?是不是其本身就可以在无机盐培养基 ...

问题是对照中,我没有添加碳源的哦
两天就能长的很浓,在试管中。在瓶子中又长的不好。
快乐生活,我快乐
4楼2011-03-10 14:47:11
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