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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】真菌分子鉴定问题
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】真菌分子鉴定问题 已有7人参与

真菌分子鉴定里必须用到载体连接吗？急~~~
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1楼 2011-02-25 17:14:45
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-27 16:13:39:
PCR完了之后跑电泳，看到有想要的产物产生，就将PCR产物送去测序。你们实验室没人做过？

再请教一下：电泳时用TAE还是TBE好些?关于真菌分子鉴定~多谢！
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12楼2011-02-28 10:52:45
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查看全部 17 个回答

guozhibin

银虫 (小有名气)
应该不是吧，用真菌的rDNA通用引物ITS扩增出来后，直接测序就可以了。
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2楼2011-02-25 21:04:04
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ottolzm

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 21:33:47
用不用载体 取决于你的实验室 得到纯化后的真菌遗传指针信息 然后送交测序公司即可(但是像上海生工这样的公司 会要求你的DNA 的浓度为OD260/OD280到1.8至2.0 而且要你提供引物 如果是经典的比如18S等的 则不要 否则经常会测不出信号 如果实验室钱多 那就送到TaKaRa 日本人的服务很全面 而且质量可靠 但是价钱奇贵)   如果你们实验室做载体连接比较多 那就连个载体 再送出去测序 同样也要提供引物 但这样的话 可能会便宜一点 但是这样就将测序的一部分风险转嫁到你自己的因素上了 所以 这完全取决于你的选择了 祝你好运
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3楼2011-02-25 21:15:21
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★ ★ ★
scelab(金币+3): 谢谢交流 2011-02-26 09:52:40
直接测序对回收DNA的要求比较高，有可能测不出来；
但是连接载体有可能连接上PCR过程中错配的；
综上，选择连接载体的，多送几个样，同时在PCR过程中选用高保真的酶
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一直向前！
4楼2011-02-26 09:14:46
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