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Louie.F

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】网上盛传的冷酒精沉淀法抗体纯化是否真能用？？？？？？？？？？

本人欲采取一种简单的方法提取免疫球蛋白，由于一些原因不能采用辛酸-硫酸铵沉淀法，在网上查得冷酒精沉淀法，经简单试提，所得抗体浊度极大，很是怀疑这种方法能否可行

下面是网上的方法http://www.biomart.cn/experiment/430/502/503/507/17893.htm
1、血清加3倍体积的蒸馏水，调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下，加预冷的酒精（-20℃）到最终浓度为20%，保持在-5℃。产生的沉淀（a），含有大多数种类的免疫球蛋白。
2、沉淀a悬浮于25倍体积的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1，产生的沉淀（b），包括大部分的IgA和IgM，IgG留在上清液内。
3、调节
上清液的pH到7.4，加冷酒精（-20℃～-30℃）到最终浓度为25%，维持在-5℃。所得到的沉淀（c）含有90%～98% IgG。不同动物，IgG分离的条件和产量略有不同。见下表。
4、从沉淀（b）可按下述方法进一步分离出IgA和IgM的混合物：将沉淀（b）悬浮在0℃ 水中，调节 pH到5.1，离心去除不溶的蛋白。调节上清液离子强度到0.01～0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最终浓度为10%，保持在 –2℃或-3℃低温，所得的沉淀（b-b）主要含IgA和IgM。

本人也知道，网上的东西多半不靠谱，若是有种方法提取经验的人，希望给予一点提示

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