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x286667863

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】有没有做SOD这个东东的虫虫啊? 已有3人参与

小虫主要从血液中提取SOD,不知都有没有志同道合的虫友
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laofangliang

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我也正在做,我按照说明书把血清和红细胞分开并做成SOD提取液来测的,不知道有没有好的总结给小弟指导一下
2楼2011-05-03 17:14:01
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roomofxw

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
超氧化物歧化酶?
做过重组的,还没有来得及测活性
3楼2011-05-03 17:23:38
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x286667863

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by laofangliang at 2011-05-03 17:14:01:
我也正在做,我按照说明书把血清和红细胞分开并做成SOD提取液来测的,不知道有没有好的总结给小弟指导一下

你是按照SOD试剂盒做的吗?应该是将血浆和血球分离后,将血球液用生理盐水洗涤,然后加水溶胀破碎,再加氯仿和乙醇,添加量按照说明书中的就可以,分离取上清,就可以测了,活性还是比较高的。
4楼2011-05-04 08:57:51
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x286667863

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by roomofxw at 2011-05-03 17:23:38:
超氧化物歧化酶?
做过重组的,还没有来得及测活性

原来是搞基因的啊,你好,测活我用过试剂盒和微量邻苯三酚自氧化法(325nm),两种方法没有做过比较,因为没有标品。欢迎常来探讨!
5楼2011-05-04 09:00:16
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laofangliang

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by x286667863 at 2011-05-04 08:57:51:
你是按照SOD试剂盒做的吗?应该是将血浆和血球分离后,将血球液用生理盐水洗涤,然后加水溶胀破碎,再加氯仿和乙醇,添加量按照说明书中的就可以,分离取上清,就可以测了,活性还是比较高的。

是啊  我想请问一下,测血清时需要像红细胞一样做成抽提液吗?
6楼2011-05-04 21:58:28
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x286667863

银虫 (正式写手)

内容已删除
7楼2011-05-05 08:49:43
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laofangliang

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by x286667863 at 2011-05-05 08:49:43:
血清的我还没有测过,不过说明书上好像有具体的使用方法的,我觉得让全血自然凝结,就是不加抗凝剂的,然后静置取上清液,即为血清,应该可以直接测的,不用像红细胞那么麻烦,因为红细胞中有色蛋白(血红蛋白 ...

我明白了,但是在做SOD、MDA抽提液的时候,即加冰双蒸水、95%乙醇和氯仿之后,离心得到的上清液就含SOD和MDA,SOD本身就是蛋白啊,为什么不跟血红蛋白一起被沉淀下来呢?而SOD和MDA偏偏留在上清液中?
8楼2011-05-05 17:21:18
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x286667863

银虫 (正式写手)

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-06 10:13:28
引用回帖:
Originally posted by laofangliang at 2011-05-05 17:21:18:
我明白了,但是在做SOD、MDA抽提液的时候,即加冰双蒸水、95%乙醇和氯仿之后,离心得到的上清液就含SOD和MDA,SOD本身就是蛋白啊,为什么不跟血红蛋白一起被沉淀下来呢?而SOD和MDA偏偏留在上清液中?

SOD对氯仿和乙醇不敏感,所以加入有机试剂(氯仿和乙醇)后不会因为溶液的介电常数改变而沉淀,但后期加入丙酮的话SOD就会沉淀下来的。这就是后期纯化需要的了。
9楼2011-05-06 09:48:33
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laofangliang

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
原来如此,受教了,谢谢!
10楼2011-05-06 22:07:28
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