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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有没有做SOD这个东东的虫虫啊？
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x286667863

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】有没有做SOD这个东东的虫虫啊？ 已有3人参与

小虫主要从血液中提取SOD，不知都有没有志同道合的虫友
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1楼 2011-02-19 15:49:25
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laofangliang

新虫 (初入文坛)
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我也正在做，我按照说明书把血清和红细胞分开并做成SOD提取液来测的，不知道有没有好的总结给小弟指导一下
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2楼2011-05-03 17:14:01
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★
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超氧化物歧化酶？
做过重组的，还没有来得及测活性
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3楼2011-05-03 17:23:38
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x286667863

银虫 (正式写手)
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Originally posted by laofangliang at 2011-05-03 17:14:01:
我也正在做，我按照说明书把血清和红细胞分开并做成SOD提取液来测的，不知道有没有好的总结给小弟指导一下

你是按照SOD试剂盒做的吗？应该是将血浆和血球分离后，将血球液用生理盐水洗涤，然后加水溶胀破碎，再加氯仿和乙醇，添加量按照说明书中的就可以，分离取上清，就可以测了，活性还是比较高的。
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4楼2011-05-04 08:57:51
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银虫 (正式写手)
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Originally posted by roomofxw at 2011-05-03 17:23:38:
超氧化物歧化酶？
做过重组的，还没有来得及测活性

原来是搞基因的啊，你好，测活我用过试剂盒和微量邻苯三酚自氧化法（325nm），两种方法没有做过比较，因为没有标品。欢迎常来探讨！
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5楼2011-05-04 09:00:16
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laofangliang

新虫 (初入文坛)
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Originally posted by x286667863 at 2011-05-04 08:57:51:
你是按照SOD试剂盒做的吗？应该是将血浆和血球分离后，将血球液用生理盐水洗涤，然后加水溶胀破碎，再加氯仿和乙醇，添加量按照说明书中的就可以，分离取上清，就可以测了，活性还是比较高的。

是啊  我想请问一下，测血清时需要像红细胞一样做成抽提液吗？
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6楼2011-05-04 21:58:28
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x286667863

银虫 (正式写手)
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7楼2011-05-05 08:49:43
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laofangliang

新虫 (初入文坛)
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Originally posted by x286667863 at 2011-05-05 08:49:43:
血清的我还没有测过，不过说明书上好像有具体的使用方法的，我觉得让全血自然凝结，就是不加抗凝剂的，然后静置取上清液，即为血清，应该可以直接测的，不用像红细胞那么麻烦，因为红细胞中有色蛋白（血红蛋白 ...

我明白了，但是在做SOD、MDA抽提液的时候，即加冰双蒸水、95%乙醇和氯仿之后，离心得到的上清液就含SOD和MDA，SOD本身就是蛋白啊，为什么不跟血红蛋白一起被沉淀下来呢？而SOD和MDA偏偏留在上清液中？
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8楼2011-05-05 17:21:18
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x286667863

银虫 (正式写手)
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-06 10:13:28
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Originally posted by laofangliang at 2011-05-05 17:21:18:
我明白了，但是在做SOD、MDA抽提液的时候，即加冰双蒸水、95%乙醇和氯仿之后，离心得到的上清液就含SOD和MDA，SOD本身就是蛋白啊，为什么不跟血红蛋白一起被沉淀下来呢？而SOD和MDA偏偏留在上清液中？

SOD对氯仿和乙醇不敏感，所以加入有机试剂（氯仿和乙醇）后不会因为溶液的介电常数改变而沉淀，但后期加入丙酮的话SOD就会沉淀下来的。这就是后期纯化需要的了。
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9楼2011-05-06 09:48:33
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laofangliang

新虫 (初入文坛)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
原来如此，受教了，谢谢！
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10楼2011-05-06 22:07:28
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