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1楼2011-02-19 15:49:25

laofangliang

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我也正在做，我按照说明书把血清和红细胞分开并做成SOD提取液来测的，不知道有没有好的总结给小弟指导一下

2楼2011-05-03 17:14:01

roomofxw

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超氧化物歧化酶？
做过重组的，还没有来得及测活性

3楼2011-05-03 17:23:38

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Originally posted by laofangliang at 2011-05-03 17:14:01:
我也正在做，我按照说明书把血清和红细胞分开并做成SOD提取液来测的，不知道有没有好的总结给小弟指导一下

你是按照SOD试剂盒做的吗？应该是将血浆和血球分离后，将血球液用生理盐水洗涤，然后加水溶胀破碎，再加氯仿和乙醇，添加量按照说明书中的就可以，分离取上清，就可以测了，活性还是比较高的。

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4楼2011-05-04 08:57:51

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Originally posted by roomofxw at 2011-05-03 17:23:38:
超氧化物歧化酶？
做过重组的，还没有来得及测活性

原来是搞基因的啊，你好，测活我用过试剂盒和微量邻苯三酚自氧化法（325nm），两种方法没有做过比较，因为没有标品。欢迎常来探讨！

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5楼2011-05-04 09:00:16

laofangliang

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Originally posted by x286667863 at 2011-05-04 08:57:51:
你是按照SOD试剂盒做的吗？应该是将血浆和血球分离后，将血球液用生理盐水洗涤，然后加水溶胀破碎，再加氯仿和乙醇，添加量按照说明书中的就可以，分离取上清，就可以测了，活性还是比较高的。

是啊我想请问一下，测血清时需要像红细胞一样做成抽提液吗？

6楼2011-05-04 21:58:28

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7楼2011-05-05 08:49:43

laofangliang

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Originally posted by x286667863 at 2011-05-05 08:49:43:
血清的我还没有测过，不过说明书上好像有具体的使用方法的，我觉得让全血自然凝结，就是不加抗凝剂的，然后静置取上清液，即为血清，应该可以直接测的，不用像红细胞那么麻烦，因为红细胞中有色蛋白（血红蛋白 ...

我明白了，但是在做SOD、MDA抽提液的时候，即加冰双蒸水、95%乙醇和氯仿之后，离心得到的上清液就含SOD和MDA，SOD本身就是蛋白啊，为什么不跟血红蛋白一起被沉淀下来呢？而SOD和MDA偏偏留在上清液中？

8楼2011-05-05 17:21:18

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Originally posted by laofangliang at 2011-05-05 17:21:18:
我明白了，但是在做SOD、MDA抽提液的时候，即加冰双蒸水、95%乙醇和氯仿之后，离心得到的上清液就含SOD和MDA，SOD本身就是蛋白啊，为什么不跟血红蛋白一起被沉淀下来呢？而SOD和MDA偏偏留在上清液中？

SOD对氯仿和乙醇不敏感，所以加入有机试剂（氯仿和乙醇）后不会因为溶液的介电常数改变而沉淀，但后期加入丙酮的话SOD就会沉淀下来的。这就是后期纯化需要的了。

9楼2011-05-06 09:48:33

laofangliang

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原来如此，受教了，谢谢！

10楼2011-05-06 22:07:28