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mmzhang

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于启动子区域克隆 已有10人参与

最近在构建GUS 载体,但是遇到了一个大问题:我已经通过多次的Tail-PCR得到了大约2000bp的启动子区域的序列(序列是根据几次的Tail-PCR测序结果拼接起来的),然后本人根据得到的序列设计了两对引物准备扩增得到片段并构建GUS载体,但是做了几次PCR后一个条带都没有,已经试了不同的PCR条件还是不行,我用的聚合酶是Takara的HS primerstar,现在不知道该怎么办了,请各位大侠能够提供一些意见和建议。
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mmzhang

新虫 (小有名气)

也考虑过这个问题,但是我重复了两次序列拼接,应该没有问题吧
3楼2011-02-18 09:46:12
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mmzhang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2011-02-18 06:39:12:
1、拼接错误

2、设计的引物PCR条件不对

3、可以考虑用巢式做一下,看是否能扩出来

谢谢了,准备设计新的引物再做一次巢式,希望能成功!
9楼2011-02-21 12:16:26
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