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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
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_然然

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 猫咪胖胖 at 2011-02-13 22:23:25:
我PCR回收得到的片段，与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带，但测序总显示是空载体，不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。

如果你用m13引物p，两引物之间有一段载体序列，所以会有条带，你要比一下是不是跟你的目的条带相近，p出来的条带要比你的目的条带大一点就是引物间的载体序列。
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21楼2011-03-19 23:20:05
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2010_撒家

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近也是如此，PCR切胶纯化后，进行克隆，老是假阳性。重复多次，还是没有克隆出。原因到底在哪里，老是找不出。
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22楼2011-03-20 12:49:59
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dingdingsky

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先确保你胶回收没有问题，其次的话去酶切验证一下吧
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23楼2011-03-20 13:16:29
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
送测样品是质粒还是菌液，怀疑污染了
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一直向前！
24楼2011-03-20 19:32:00
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vs570588

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得菌落PCR挺准的，用M13引物，再选个小一点的Marker,我前几天做克隆，全空载，用菌落PCR，Marker2000，做有条带，测序说全空载，我自己换了DL500marker,再做菌落后跑胶，果然几乎所有条带都是在200以下，因为得目的条带要200，理论上条带应该在200到300。所以我决定重新做。大家说克隆最关键的一部是啥？
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25楼2011-03-20 20:29:36
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换测序公司吧，测序公司不一样可靠的，也是人在操作机器
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26楼2011-03-20 20:34:21
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cdde1234

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pcr试剂有可能被你污染了
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27楼2015-06-26 15:12:54
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