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_然然

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 猫咪胖胖 at 2011-02-13 22:23:25:
我PCR回收得到的片段,与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带,但测序总显示是空载体,不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。

如果你用m13引物p,两引物之间有一段载体序列,所以会有条带,你要比一下是不是跟你的目的条带相近,p出来的条带要比你的目的条带大一点就是引物间的载体序列。
21楼2011-03-19 23:20:05
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2010_撒家

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我最近也是如此,PCR切胶纯化后,进行克隆,老是假阳性。重复多次,还是没有克隆出。原因到底在哪里,老是找不出。
22楼2011-03-20 12:49:59
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dingdingsky

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先确保你胶回收没有问题,其次的话去酶切验证一下吧
23楼2011-03-20 13:16:29
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
送测样品是质粒还是菌液,怀疑污染了
一直向前!
24楼2011-03-20 19:32:00
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vs570588

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得菌落PCR挺准的,用M13引物,再选个小一点的Marker,我前几天做克隆,全空载,用菌落PCR,Marker2000,做有条带,测序说全空载,我自己换了DL500marker,再做菌落后跑胶,果然几乎所有条带都是在200以下,因为得目的条带要200,理论上条带应该在200到300。所以我决定重新做。大家说克隆最关键的一部是啥?
25楼2011-03-20 20:29:36
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zgb1982

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
换测序公司吧,测序公司不一样可靠的,也是人在操作机器
26楼2011-03-20 20:34:21
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cdde1234

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
pcr试剂有可能被你污染了
27楼2015-06-26 15:12:54
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