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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)


Taq酶就是普通的酶,T载体新的旧的都用过。
P出来了 回收到了 就应该能连上啊。。。
11楼2011-02-19 20:50:21
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人,我型我秀!

优秀版主


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引用回帖:
Originally posted by 猫咪胖胖 at 2011-02-19 12:50:21:
Taq酶就是普通的酶,T载体新的旧的都用过。
P出来了 回收到了 就应该能连上啊。。。

可以回复引用一下。想让谁回答?
人生不过几十年,成败荣辱都在天,是非恩怨莫在意,健康快乐最值钱,自古人间苦无边,看得高远境如仙,愿你不为凡事恼,轻松快乐每一天。
12楼2011-02-19 21:01:04
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


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是不是PCR产物有问题或是载体放的时间过长了?
jiayoubashaonian
13楼2011-02-19 21:10:13
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猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-02-19 21:10:13:
是不是PCR产物有问题或是载体放的时间过长了?

不是,新的旧的都用过。
14楼2011-03-16 22:54:37
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猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 猫咪胖胖 at 2011-03-16 22:54:37:
不是,新的旧的都用过。

我觉得可能是产物的问题,但是不知道问题在哪
15楼2011-03-16 22:56:41
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔


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我每次都是先挑菌摇菌做菌液PCR,选择有目的条带的提质粒酶切,然后再选择测序,虽然有点麻烦,但避免了楼主遇到的问题
一直向前!
16楼2011-03-16 23:07:13
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poog502

木虫 (正式写手)


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PMD-18 T载体效率低,用用pGEM-T载体效率极高
17楼2011-03-16 23:14:39
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zhangby2002

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by 猫咪胖胖 at 2011-02-13 22:23:25:
我PCR回收得到的片段,与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带,但测序总显示是空载体,不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。

我和你的问题一样呀~也比较郁闷!我也做啦双酶切鉴定啦
业精于勤,荒于嬉;行成于思,毁于随。
18楼2011-03-19 17:31:56
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zhangby2002

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-16 23:07:13:
我每次都是先挑菌摇菌做菌液PCR,选择有目的条带的提质粒酶切,然后再选择测序,虽然有点麻烦,但避免了楼主遇到的问题

我和你的程序一样呀,做啦双酶切,用的载体是PMD18-T,送测序公司,说没信号或者出现套峰,结果不好。
业精于勤,荒于嬉;行成于思,毁于随。
19楼2011-03-19 17:34:10
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taigongzaici

新虫 (小有名气)


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1.搞清楚你的载体是否有问题
2.TA连接是常规实验,应该很好做。TAKARA的18,19都没问题,效率很高
3.建议用M13-47和48做菌液PCR检测,看看到底有无片段插入(酶切也可以)
4.换个测序公司试试看
20楼2011-03-19 20:13:19
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