应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
53/1返回列表
查看: 4741  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体 已有21人参与

我PCR回收得到的片段，与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带，但测序总显示是空载体，不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-02-13 22:23:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2010_撒家

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近也是如此，PCR切胶纯化后，进行克隆，老是假阳性。重复多次，还是没有克隆出。原因到底在哪里，老是找不出。
赞一下(1人) 回复此楼
22楼2011-03-20 12:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
恩，酶切验证最可靠。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2011-02-14 08:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): 谢谢交流 2011-02-14 10:25:15
酶切一下，如果切不对，说明你前面酶切的酶有核酸外切酶活性，连接之前的那次酶切就少了几个碱基了，这可能是原因之一，用纯一点的酶。
另外，菌P能出结果不一定就是对的，PCR这东西很难说的，有一点点都能扩增出来，说明不了啥太多的问题。
还有可能是连接的时候手法操作有问题，换个人连接试试看，生物实验这东西有时候是挺邪门的，或者回去睡上三天大觉，回来就都出来了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-02-14 09:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR产物去测序啊，还能提高保密性，多好啊。。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-02-14 14:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +10 路痴小琪 2026-03-27 10/500 2026-03-28 03:36 by fmesaito
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +5 脚滑的守法公民 2026-03-27 5/250 2026-03-27 22:50 by lcl13500..
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 269专硕求调剂 +10 金恩贝 2026-03-21 10/500 2026-03-27 15:10 by caszguilin
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +3 IceGuo 2026-03-26 4/200 2026-03-27 05:35 by user003
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭