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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何对PCR测序产物进行分析？
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傻子

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+2): 谢谢交流 2011-02-12 21:10:11
PCR 产物直接测序是会产生在序列前后各100bp左右的测序结果不准确，那部分结果基本是不可读的，所以，你要确定你所需序列的位置，如果是靠近两端，建议连入载体测序或者重新设计引物，使所需序列在PCR产物的中间部分测序。同时PCR产物使用双向测序以保证准确，不知你测序的目的，是否要查找突变点，如果是的话，在测序后的矫正过程中要注意套风的辨认，并且需要连入载体多次验证测序。
序列分析的话，推荐DNAstar lasergene中的SeqMan，这个软件可以直接读取测序峰图进行比较，在手工矫正测序图的时候很方便，突变点也可以通过软件功能显示。
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1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。
11楼2011-02-12 08:57:02
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丫头珠

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by guoxingjun2008 at 2011-02-10 09:42:48
1060bp比较长了，单向肯定是不准的，建议用双向拼接后会准确很多，同时用高保真酶，完了再加A反应，之后就可以连接T载体，这样测序既准确也能保证不会人为渗入突变碱基。  
    同时，如果和原序列比对不上的话 ...

我也是分子生物学实验的新手，我克基因的时候是把目的条带切胶回收，然后连接T载体24H后，连接入感受态DH-5阿尔法细胞，然后涂板，第二天挑菌，培养15H，菌落PCR，有结果了就送测序，但是楼上说的A反应是什么呢？如果我测得是正向的，比对出的结果不是目的基因，还需要反向互补吗？
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12楼2015-03-20 11:02:16
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