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傻子

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
翱宇(金币+2): 谢谢交流 2011-02-12 21:10:11
PCR 产物直接测序是会产生在序列前后各100bp左右的测序结果不准确,那部分结果基本是不可读的,所以,你要确定你所需序列的位置,如果是靠近两端,建议连入载体测序或者重新设计引物,使所需序列在PCR产物的中间部分测序。同时PCR产物使用双向测序以保证准确,不知你测序的目的,是否要查找突变点,如果是的话,在测序后的矫正过程中要注意套风的辨认,并且需要连入载体多次验证测序。
序列分析的话,推荐DNAstar lasergene中的SeqMan,这个软件可以直接读取测序峰图进行比较,在手工矫正测序图的时候很方便,突变点也可以通过软件功能显示。
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
11楼2011-02-12 08:57:02
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丫头珠

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by guoxingjun2008 at 2011-02-10 09:42:48
1060bp比较长了,单向肯定是不准的,建议用双向拼接后会准确很多,同时用高保真酶,完了再加A反应,之后就可以连接T载体,这样测序既准确也能保证不会人为渗入突变碱基。  
    同时,如果和原序列比对不上的话 ...

我也是分子生物学实验的新手,我克基因的时候是把目的条带切胶回收,然后连接T载体24H后,连接入感受态DH-5阿尔法细胞,然后涂板,第二天挑菌,培养15H,菌落PCR,有结果了就送测序,但是楼上说的A反应是什么呢?如果我测得是正向的,比对出的结果不是目的基因,还需要反向互补吗?
12楼2015-03-20 11:02:16
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