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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA退火和磷酸化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lingluoying

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】DNA退火和磷酸化 已有2人参与

请问，如何合成了两端带酶切位点的四条单链DNA，其中两两是互补链，需要连在一起，再构建到载体上，应该怎么操作呢？我是采用互补链先各自退火（等体积混合，置于沸水中冷却到室温即可），再从中取等摩尔混合，用T4 PNK酶磷酸化处理后连接载体。但觉得有些问题，是不是操作有误？
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1楼 2011-01-21 13:32:06
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-01-21 19:34:42
退火了两次是什么意思？
就直接把互补的两条链等摩尔混合，沸水浴变性后缓慢冷却至室温就行了，然后可以直接和载体连接（如果载体是酶切的载体，没有去磷酸化的话，片段可以不用磷酸化）
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2楼2011-01-21 19:13:21
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lingluoying

新虫 (初入文坛)
可问题是互补的两段各自退火后，只有互补链连起来了，前后两部分并没有连成长链呀，设计时中间一段是采用的一小段互补的序列的。
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3楼2011-01-24 13:25:59
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