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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】这样的情况应该如何选择进一步的纯化步骤？
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

[交流] 【求助/交流】这样的情况应该如何选择进一步的纯化步骤？ 已有3人参与

如附件中图所示：最右边的带为目的蛋白，HIS-TAG利用镍柱纯化，感觉目的蛋白下还有一条颜色比较浅的带。对于这种情况是否有必要进一步纯化？可以考虑采用何种纯化方法呢？请各位指教
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1楼 2011-01-13 14:08:45
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by zh1987hs at 2011-01-13 14:23:35:

那么针对这个情况，又没有可能是电泳本身的原因导致一种蛋白出现两条带呢？还是肯定是杂蛋白？我之前用过40%的咪唑洗，确实洗掉了很多杂蛋白，再用60%的洗脱目的蛋白，跑电泳用的是60%洗脱的蛋白样品

也可能是电泳本身的问题或者蛋白降解等。
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4楼2011-01-13 15:08:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2011-01-13 15:08:46
都利用HIS-TAG镍柱纯化了，还继续纯化也没多大意义了。
镍柱纯化时用低浓度咪唑预洗杂质，然后高浓度咪唑洗目的蛋白看看。
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2楼2011-01-13 14:13:44
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-01-13 14:13:44:
都利用HIS-TAG镍柱纯化了，还继续纯化也没多大意义了。
镍柱纯化时用低浓度咪唑预洗杂质，然后高浓度咪唑洗目的蛋白看看。

那么针对这个情况，又没有可能是电泳本身的原因导致一种蛋白出现两条带呢？还是肯定是杂蛋白？我之前用过40%的咪唑洗，确实洗掉了很多杂蛋白，再用60%的洗脱目的蛋白，跑电泳用的是60%洗脱的蛋白样品
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3楼2011-01-13 14:23:35
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
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dhd997(金币+1):good 2011-01-13 15:14:47
切标签，反穿。

不过好像是你的胶跑得不好，都有重影呢？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2011-01-13 15:10:16
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