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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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jen1006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR结果(望高手进来拆招……本人第一次做TA克隆,么经验)已有9人参与


直接加单克隆菌液于普通PCR体系,M13载体通用引物,普通PCR程序,结果于照片,目的带690bp。不知道原因,是不是假阳性啊这个样子?

[ Last edited by jen1006 on 2011-1-10 at 10:37 ]
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jen1006

新虫 (小有名气)

谢谢啊!就怕不懂得人乱给我指点!
引用回帖:
Originally posted by 绿色荧光蛋白 at 2011-01-11 21:41:34:
哎,还是某来帮你解答下吧,看了这么多人回答都不靠谱啊,呵呵。

若用菌液做PCR快速筛选真转化子,方法是这样子的,记住了啊:取菌液50 uL-100 uL,盖紧盖子,用PARAFILM膜封好,这样做事防止加热过程中管口蹦 ...

12楼2011-01-12 10:47:23
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★ ★
dhd997(金币+3):谢谢交流 2011-01-10 16:43:34
貌似这几个在倒数第三条带(marker)附近都有带,不知道在maker上是多少bp。

别重复了,直接挑两个白斑提质粒做下酶切(前提是多克隆位点上有合适的site)。

你的菌液是不是加多了?多大的PCR体系,加了多少ul菌液?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-10 10:43:54
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

690bp,可以直接挑克隆送去测序了。一个反应23块钱,你在这儿做来做去时间也花了不少,酶用了不少,不划算。呵呵。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2011-01-10 10:56:12
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silicare

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优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
非特异性产物不除,答案不解
4楼2011-01-10 11:50:39
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