24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3956  |  回复: 26

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-01-10 13:03:29:


恩,谢谢美女,呵呵~我用的是电转化,有两个片段可以连接上,其余的都不能连接,我用空载体转化,效率还不错。。

什么叫还不错,几次方? 连接片段和空载体是两码事
11楼2011-01-10 13:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-10 13:15:01:



什么叫还不错,几次方? 连接片段和空载体是两码事

我用的感受态细胞是DH5a,空载体转化,100uL涂抗性板长出的菌落是密密麻麻的整个平板,没有计数,大约是上千吧。
我自己的连接上的产物是100uL的转化产物涂板,长出阳性克隆是50个左右,阴性对照没有长出菌落。
请问连接和转化这些过程中还有没有特别的注意事项呢? 昨天晚上听一位师姐说,感受态细胞从-80℃冰箱拿出来立刻用手捂化,然后立刻转化,而且感受态细胞最好用买的,那样转化效率会高一些。可是我们实验室的感受态细胞都是自己做的。
12楼2011-01-10 14:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-01-10 14:17:46:



我用的感受态细胞是DH5a,空载体转化,100uL涂抗性板长出的菌落是密密麻麻的整个平板,没有计数,大约是上千吧。
我自己的连接上的产物是100uL的转化产物涂板,长出阳性克隆是50个左右,阴性对照没有长出菌 ...

你还是 没有明白转化效率的重要性

空载体做转化没有不长的
13楼2011-01-10 14:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-10 14:22:52:


你还是 没有明白转化效率的重要性

空载体做转化没有不长的

哦,那我该怎样测量感受态细胞的转化效率呢?
14楼2011-01-10 14:24:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-01-10 14:24:25:


哦,那我该怎样测量感受态细胞的转化效率呢?

网上到处都是,百度一下就可以

一般就是转化0.1ng 看看100ul感受态能够长出多少个菌斑,换算成1ug的菌斑数就是转化效率
15楼2011-01-10 14:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-10 14:30:09:



网上到处都是,百度一下就可以

一般就是转化0.1ng 看看100ul感受态能够长出多少个菌斑,换算成1ug的菌斑数就是转化效率

哦,好,请问在转化过程中还需要注意哪些事项呢?
16楼2011-01-10 14:37:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-01-10 14:37:51:


哦,好,请问在转化过程中还需要注意哪些事项呢?

低温,轻柔,快速,无菌,一个高效感受态是前提,做连接产物(尤其你这还是退火的)至少也要6次方以上的效率,7次方最佳,8次方必成功

6次方以下就扔了吧
17楼2011-01-10 14:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-10 14:43:01:



低温,轻柔,快速,无菌,一个高效感受态是前提,做连接产物(尤其你这还是退火的)至少也要6次方以上的效率,7次方最佳,8次方必成功

6次方以下就扔了吧

恩,好,真是太感谢你了~请问你用的感受态细胞也都是自己制作的吗?
18楼2011-01-10 14:46:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-01-10 14:46:48:

恩,好,真是太感谢你了~请问你用的感受态细胞也都是自己制作的吗?

分子克隆的就很好
19楼2011-01-10 14:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-01-10 14:49:04:



分子克隆的就很好

分子克隆?什么意思?是分子克隆书上面写的吗?
20楼2011-01-10 14:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangdandelia 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿同济大学323分(080500)求调剂 +8 yikeniu 2026-04-01 8/400 2026-04-05 18:15 by cql1109
[考研] 288求调剂 +7 没有答案_ 2026-04-05 7/350 2026-04-05 17:01 by yulian1987
[考研] 298分 070300求调剂 +15 zwen03 2026-04-02 15/750 2026-04-05 12:52 by Hdyxbekcb
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 292分,材料与化工,申请调剂 +22 程晴之 2026-04-01 26/1300 2026-04-04 22:03 by hemengdong
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-03-31 5/250 2026-04-04 19:45 by 1753564080
[考研] 306求调剂 +3 hyb上名工 2026-04-02 3/150 2026-04-04 18:12 by 热情沙漠
[论文投稿] 求文献 5+3 ys879651$ 2026-04-02 3/150 2026-04-04 17:22 by bobvan
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 总分328生物与医药考数学求调剂 +7 aaadim 2026-04-02 9/450 2026-04-03 22:53 by syh9288
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 08工科275求调剂,可跨考。 +5 AaAa7420 2026-03-31 5/250 2026-04-01 15:21 by 159357hjz
[考研] 085600,321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 生物学 377分 +6 zzll03 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:33 by 唐沐儿
[考研] 一志愿西电085401数一英一299求调剂 六级521 +4 爱吃大鸭梨 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:51 by 搏击518
信息提示
请填处理意见