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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做过,直接95度几分钟后,再退火应该就行了,要求应该不高吧
21楼2011-01-10 15:06:23
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 世外清风 at 2011-01-10 15:06:23:
我做过,直接95度几分钟后,再退火应该就行了,要求应该不高吧

那你的DNA退火体系是怎么加的呢?DNA浓度是多少啊?
22楼2011-01-11 09:08:20
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个我的没太多要求,两条单链在1比1差不多,不知道你的怎么样
23楼2011-01-12 09:10:57
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manman424

禁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽

24楼2011-01-12 10:22:04
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 世外清风 at 2011-01-12 09:10:57:
这个我的没太多要求,两条单链在1比1差不多,不知道你的怎么样

体系中DNA的浓度是多少uM?
25楼2011-01-12 17:58:11
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by manman424 at 2011-01-12 10:22:04:

   

请问你的电转化实验是转化到什么菌里?我们做乳酸菌的电转,虽然也摸索了很多次,但都不成熟,不很成功,不知道是质粒没有连接上还是电转条件不对。

转到大肠杆菌DH5a中啊!
26楼2011-01-12 17:58:59
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wendy_2002

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-09 23:43:55
你的单链多长?我通常是两条59nt互补形成双链,毫无鸭梨~次次成功

麻烦问一下,这个单链退火为双链的PCR条件怎么设置啊?我刚做这个,有点晕。单链20bp,95℃ 5min,ramp to 25℃ at a rate of -1℃/cycle。这样子是说,
1    95℃ 5min,
2    95℃ 5min  -1℃/cycle  70 cycle
3    72℃ 10min???
感觉不对啊
这PCR条件怎么设置呢?有问到说直接95℃ 5min然后关掉机器,东西不拿出来,自然到室温就好了,这样可以吗?期待您的回答~~~
27楼2017-08-07 18:33:29
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