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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA退火
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做过，直接95度几分钟后，再退火应该就行了，要求应该不高吧
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21楼2011-01-10 15:06:23
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 世外清风 at 2011-01-10 15:06:23:
我做过，直接95度几分钟后，再退火应该就行了，要求应该不高吧

那你的DNA退火体系是怎么加的呢？DNA浓度是多少啊？
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22楼2011-01-11 09:08:20
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个我的没太多要求，两条单链在1比1差不多，不知道你的怎么样
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23楼2011-01-12 09:10:57
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manman424

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
24楼2011-01-12 10:22:04
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 世外清风 at 2011-01-12 09:10:57:
这个我的没太多要求，两条单链在1比1差不多，不知道你的怎么样

体系中DNA的浓度是多少uM？
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25楼2011-01-12 17:58:11
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by manman424 at 2011-01-12 10:22:04:

   

请问你的电转化实验是转化到什么菌里？我们做乳酸菌的电转，虽然也摸索了很多次，但都不成熟，不很成功，不知道是质粒没有连接上还是电转条件不对。

转到大肠杆菌DH5a中啊！
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26楼2011-01-12 17:58:59
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wendy_2002

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-09 23:43:55
你的单链多长？我通常是两条59nt互补形成双链，毫无鸭梨~次次成功

麻烦问一下，这个单链退火为双链的PCR条件怎么设置啊？我刚做这个，有点晕。单链20bp，95℃ 5min，ramp to 25℃ at a rate of -1℃/cycle。这样子是说，
1    95℃ 5min,
2    95℃ 5min  -1℃/cycle  70 cycle
3    72℃ 10min？？？
感觉不对啊
这PCR条件怎么设置呢？有问到说直接95℃ 5min然后关掉机器，东西不拿出来，自然到室温就好了，这样可以吗？期待您的回答~~~
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27楼2017-08-07 18:33:29
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