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tanxi125

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】ISSR有拖带现象 已有3人参与

我是把水、buffer、dNTP(2.5mM),MgCl,和模板,加在一起,然后分装成19管,分别对19条引物进行筛选,怎么会有拖带现象呢?
体系:水 12.6μl     buffer 2μl     MgCl(25mM) 1.6μl    dNTP(2.5mM)1.6μl    引物(10mM) 0.7μl    taqE  0.5μl

条带也不是很分明!

反应程序为:94℃变性5min;94℃变性30s,52℃退火45s,72℃延伸2min,45个循环;72 ℃后延伸7 mins,4 ℃保存。
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什么都得靠自己!我现在深刻理解!
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niure

禁虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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3楼2011-01-20 19:37:17
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zlq16

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的是琼脂糖凝胶电泳吗?浓度是多少?我也在做ISSR,感觉胶的质量很关键。
有朋友自远方来
2楼2011-01-20 17:07:59
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809737810

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
胶的质量问题吧!如果经费允许的话,建议用进口的琼脂糖
4楼2011-03-24 09:36:23
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