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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】乙醇沉淀法纯化cDNA
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yanglq1985

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】乙醇沉淀法纯化cDNA

想用乙醇沉淀法纯化cdna，哪位大侠啊能给点建议？最好有具体的操作步骤和原理。谢谢啊！
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1楼 2011-01-05 21:38:08
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xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-06 17:44:24
rainwander:编辑内容 2011-01-06 17:44
yanglq1985(金币+3): 2011-02-25 13:06:15
用0.7体积异丙醇沉淀。-20过夜（除蛋白类杂质）
在用3倍乙醇体积沉淀，-20，30min，可以重复提高纯度

[ Last edited by rainwander on 2011-1-6 at 17:44 ]
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4楼2011-01-06 17:22:29
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2):鼓励热心的虫友 2011-01-06 09:45:42
yanglq1985(金币+3): 2011-02-25 13:05:53
两倍的无水乙醇和十分之一的3M醋酸钠，-20℃过夜，时间短点也行，就是延长时间可以提高回收效率。
希望对你有帮助！
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2楼2011-01-06 09:24:49
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★ ★
silicare(金币+2):谢谢参与 2011-01-06 12:22:52
yanglq1985(金币+4): 2011-02-25 13:06:06
提到哪一步了？
方法可以按楼上的，也可以用异丙醇沉淀。
用-20度预冷异丙醇沉淀效果较等体积乙醇沉淀好；异丙醇约和2.5倍体积的乙醇效果相当；但DNA微溶于乙醇，使用乙醇沉淀会使部分DNA溶解损失；所以多选用-20度预冷异丙醇。一般6500倍到8000倍重力10分钟就可以将异丙醇沉淀的核酸紧密的离到管底。
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3楼2011-01-06 11:31:56
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cd52jin

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
22494楼: Originally posted by dianaofyezi at 2011-01-06 09:24:49:
两倍的无水乙醇和十分之一的3M醋酸钠，-20℃过夜，时间短点也行，就是延长时间可以提高回收效率。
希望对你有帮助！

这个方法中加多少体积的异丙醇  用过夜吗  还有就是我看到一种说法是“异丙醇的沉淀作用是非特异的” 那是不是用异丙醇处理后的沉淀还要用乙醇洗涤呢

额  第一次回复点错了  我问的是二楼

[ Last edited by cd52jin on 2012-4-21 at 22:21 ]
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5楼2012-04-21 22:19:07
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