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【求助】pET-28a b c 区别？ 已有2人参与
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| 请问那位朋友知道pET-28a b c 之间的区别，我知道三者之间各差一个碱基，不清楚具体怎么用？我的引物设计时在前面加了Ncol 和Xhol酶切位点，目的基因是成熟蛋白编码全序列，这样一来，Ncol和目的基因中都含有了起始密码子。网上看到pET-28系列三者区别就是防止目的基因插入引起编码错误，请各位帮忙！ |
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ben1147
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就是防止你在使用载体自带的起始密码子ATG的情况下，插入序列的时候产生移码突变。选择和你的插入片段能融合成同一个读码框的载体就行 如果你上游用NcoI的话，翻译直接就照着你的插入序列开始，不涉及附加的标签以及MCS序列。这样表达出来的蛋白仍然在5'端多出一段，是由NcoI位点的ATG到你真实ATG之间的序列编码的。只要你的插入序列读码框从NcoI位点开始是正确连续的，就不存在移码的问题了。可以不用管abc的区别，任意一个都行（因为有差异的部分被你切掉了）。如果这段附加序列不是三个碱基的倍数，那么仍然需要加以调整。 这样就把前面的His标签切掉了，如果插入片段里面有终止密码子的话，后面的标签也不会翻译，这样就不能利用His标签纯化了 [ Last edited by ben1147 on 2010-12-30 at 22:36 ] |
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