24小时热门版块排行榜

返回列表

疯狂的社会

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 744.6
帖子: 19
在线: 21.1小时
虫号: 583692
注册: 2008-08-01
专业: 生物化学

[交流] 【求助】pET-28a b c 区别？已有2人参与

请问那位朋友知道pET-28a b c 之间的区别，我知道三者之间各差一个碱基，不清楚具体怎么用？我的引物设计时在前面加了Ncol 和Xhol酶切位点，目的基因是成熟蛋白编码全序列，这样一来，Ncol和目的基因中都含有了起始密码子。网上看到pET-28系列三者区别就是防止目的基因插入引起编码错误，请各位帮忙！

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

每天都要过的充实！

1楼 2010-12-30 21:35:10

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 18 (小学生)
贵宾: 0.003
金币: 5847.6
红花: 6
帖子: 952
在线: 116.9小时
虫号: 709538
注册: 2009-02-26
专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

就是防止你在使用载体自带的起始密码子ATG的情况下，插入序列的时候产生移码突变。选择和你的插入片段能融合成同一个读码框的载体就行

如果你上游用NcoI的话，翻译直接就照着你的插入序列开始，不涉及附加的标签以及MCS序列。这样表达出来的蛋白仍然在5'端多出一段，是由NcoI位点的ATG到你真实ATG之间的序列编码的。只要你的插入序列读码框从NcoI位点开始是正确连续的，就不存在移码的问题了。可以不用管abc的区别，任意一个都行（因为有差异的部分被你切掉了）。如果这段附加序列不是三个碱基的倍数，那么仍然需要加以调整。

这样就把前面的His标签切掉了，如果插入片段里面有终止密码子的话，后面的标签也不会翻译，这样就不能利用His标签纯化了

[ Last edited by ben1147 on 2010-12-30 at 22:36 ]