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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR没有结果，希望高手指教
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shiyancainan

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
图片显示你的样品中有些没有提好，DNA很少。粘稠可能是糖类等杂质多，或者是DNA很多，你的应该是杂质很多。你可以重新提提看，然后测一下它的吸光度，计算出核酸含量。一般一个体系中加10-30ng的DNA应该够用了。祝好运
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21楼2010-12-23 22:03:51
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+5):很给力 2010-12-23 23:32:24
引用回帖:
Originally posted by 独孤蚕 at 2010-12-23 21:07:26:



左边是模板DNA；右边是扩增的，好像只有基因组DNA，产物很淡，肉眼看几乎可以忽 ...

蛋白污染太严重了，酚氯仿处理，然后再氯仿处理一遍。乙醇回收。操作知道的吧。

你的点样孔很亮，说明蛋白很多~~~
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22楼2010-12-23 22:05:53
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adslye

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-12-23 22:05:53:



蛋白污染太严重了，酚氯仿处理，然后再氯仿处理一遍。乙醇回收。操作知道的吧。

你的点样孔很亮，说明蛋白很多~~~

另外，一定要点marker，不要偷懒，不要省，有时候条带奇怪的时候，是第一个分析依据。
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23楼2010-12-23 22:07:34
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 独孤蚕 at 2010-12-23 22:03:51:

那能不能教我一下，孔里为什么跑不干净啊？我也不知道我点样手法哪里错了，新手就是什么都熟悉啊！

这个说不清楚，反正我点就没有，我师妹刚开始点每次都这样
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
24楼2010-12-23 22:39:00
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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)
rainwander:欢迎常来~~~~ 2010-12-23 23:43:09
谢谢这么多朋友帮忙啊！小木虫里的虫友真好，我先换上小木虫了，哈哈。
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25楼2010-12-23 22:42:48
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nutplay

新虫 (初入文坛)
★
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是不是模板浓度太高了，我用试剂盒的，50ul的体系，模板只加1ul啊。
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26楼2010-12-28 10:04:52
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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by nutplay at 2010-12-28 10:04:52:
是不是模板浓度太高了，我用试剂盒的，50ul的体系，模板只加1ul啊。

看好多人说浓度太高不好，我也这样觉得。PCR怎么也是很灵敏的啊，模板稀释好多倍也没问题的啊，不过我一直做不出来。这几天就直接拿原液P，老天竟然让我P出来了，效果很好。可能我溶解DNA时水加的本来就是很多，所以浓度也不是很高，但还是没有搞清楚为什么会这样，虽然是P出来了。
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27楼2010-12-30 22:46:13
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tryingtimes

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做PCR也是一样的条件 有时候能跑出来，有时候不行，我也不知道是什么原因！我的是25ul的体系，加1.5ul的DNA 所以我觉得你的模板浓度太高了！
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没完没了
28楼2010-12-30 23:44:19
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tryingtimes

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-12-23 21:57:34:
你点样有问题，一看就是新手，做分子实验不久的，跟我师妹一样，孔里的东西跑不干净

敢问大虾能否不吝指教啊！或者有些好的分享和技巧共享下啊！小虫也是新手，也在跑PCR 点样手法也一般般！在此谢过啦~
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没完没了
29楼2010-12-30 23:53:13
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tryingtimes at 2010-12-30 23:53:13:

敢问大虾能否不吝指教啊！或者有些好的分享和技巧共享下啊！小虫也是新手，也在跑PCR 点样手法也一般般！在此谢过啦~

饿不是大虾，饿是女的。也没什么技巧，点多了就好了
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
30楼2010-12-31 12:10:56
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