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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-12-23 11:04:13:


你的是植物基因组?太稠了很可能不是基因组是多糖和基因组的混合物。多糖为主。总之,几乎不会出现提的基因组变成很粘稠,那太浓了。除非是大量浓缩的。



左边是模板DNA;右边是扩增的,好像只有基因组DNA,产物很淡,肉眼看几乎可以忽略。不知道是什么原因,其他模板没有问题。请帮忙分析一下呢。
11楼2010-12-23 21:07:26
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板浓度太高了,你们有条件测浓度吗?用一微升就可以测浓度了。一般低于100ng/ul
才行
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
12楼2010-12-23 21:08:40
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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-12-23 21:02:25:


动物我就不清楚了,植物很可能是多糖。蛋白的话你跑胶应该能看到孔里有亮点。你有测OD值吗?

你测测浓度吧,如果光谱显示很浓,但是跑胶条带不是非常亮,那就是有污染了。因为基因组很亮的。

你的组织是 ...

鸭血液里提的DNA。你的意思是蛋白质在琼脂糖胶里跑不动,而基因组DNA会在下面,这样胶里就有两条带?我刚才给了图片,你帮我看看呢。
    另外,我260/280大概1.8左右吧,应该还行了吧。浓度100ng/μL吧,有的还多。谢谢好心人指导一下呢。
13楼2010-12-23 21:14:56
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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-12-23 21:08:40:
模板浓度太高了,你们有条件测浓度吗?用一微升就可以测浓度了。一般低于100ng/ul
才行

你的意思是模板浓度应该低一点?我的原因是浓度太高了?我今天又做了下PCR,模板又稀释了十倍,还没检测结果呢。愁死了!
14楼2010-12-23 21:16:57
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 独孤蚕 at 2010-12-23 21:16:57:

你的意思是模板浓度应该低一点?我的原因是浓度太高了?我今天又做了下PCR,模板又稀释了十倍,还没检测结果呢。愁死了!

测浓度,不要随便稀释
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
15楼2010-12-23 21:22:43
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dashuangzi

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
Sample TextSample Text稀释50.100.200做个对照,模板不要加太多,微量就够了,多稀释可以把杂质的影响降到最低,希望你能P出来。
有事大家做,有梦大家圆
16楼2010-12-23 21:29:13
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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by dashuangzi at 2010-12-23 21:29:13:
Sample TextSample Text稀释50.100.200做个对照,模板不要加太多,微量就够了,多稀释可以把杂质的影响降到最低,希望你能P出来。

你的建议很好,也有道理。我一开始就怕稀了一小点,再稀释那么大,怕模板里没有DNA了。明天我就去实践一下,感谢好心人哪!
17楼2010-12-23 21:45:53
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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-12-23 21:08:40:
模板浓度太高了,你们有条件测浓度吗?用一微升就可以测浓度了。一般低于100ng/ul
才行

请问一下我上一张图片怎么又两条带啊?蛋白质污染很严重还是什么问题?
18楼2010-12-23 21:48:11
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你点样有问题,一看就是新手,做分子实验不久的,跟我师妹一样,孔里的东西跑不干净
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
19楼2010-12-23 21:57:34
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独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-12-23 21:57:34:
你点样有问题,一看就是新手,做分子实验不久的,跟我师妹一样,孔里的东西跑不干净

那能不能教我一下,孔里为什么跑不干净啊?我也不知道我点样手法哪里错了,新手就是什么都熟悉啊!
20楼2010-12-23 22:03:51
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