应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR没有结果，希望高手指教
53/1返回列表
查看: 2081  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR没有结果，希望高手指教 已有9人参与

我最近做了一个PCR，有的模板能扩出来，有的模板扩不出来，条件都是一样的，肯定就是模板的原因了。15μL体系，模板加3μL。有的模板很稠，吸不上来。问一下，是不是反应体系中模板浓度太高了也会抑制PCR扩增啊？还是太稠了，DNA没有完全溶解，没怎么吸到DNA模板的原因（也就是相应地反应体系中模板浓度太低）？我今天把DNA原液在60℃水浴了一下，有的DNA还是很粘稠。
        求高手解决啊！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-12-23 10:52:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

独孤蚕

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by nutplay at 2010-12-28 10:04:52:
是不是模板浓度太高了，我用试剂盒的，50ul的体系，模板只加1ul啊。

看好多人说浓度太高不好，我也这样觉得。PCR怎么也是很灵敏的啊，模板稀释好多倍也没问题的啊，不过我一直做不出来。这几天就直接拿原液P，老天竟然让我P出来了，效果很好。可能我溶解DNA时水加的本来就是很多，所以浓度也不是很高，但还是没有搞清楚为什么会这样，虽然是P出来了。
赞一下 回复此楼
27楼2010-12-30 22:46:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-12-23 12:30:03
是DNA浓度太高了，再多稀释几倍，而且我们一般做20微升体系也才加1微升，你加的太多了，模板多了应该会有非特异条带，也许也会导致P不出来吧，样品多稀释几倍再试试看！好运！
赞一下(2人) 回复此楼
会不会偶尔也会想起我....
2楼2010-12-23 11:01:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶
貌似大家PCR的问题也很多，也开个专题吧
赞一下 回复此楼
会不会偶尔也会想起我....
3楼2010-12-23 11:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-12-23 12:30:15
引用回帖:
Originally posted by 独孤蚕 at 2010-12-23 10:52:42:
我最近做了一个PCR，有的模板能扩出来，有的模板扩不出来，条件都是一样的，肯定就是模板的原因了。15μL体系，模板加3μL。有的模板很稠，吸不上来。问一下，是不是反应体系中模板浓度太高了也会抑制PCR扩增啊？ ...

你的是植物基因组？太稠了很可能不是基因组是多糖和基因组的混合物。多糖为主。总之，几乎不会出现提的基因组变成很粘稠，那太浓了。除非是大量浓缩的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-12-23 11:04:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭