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ahaoli_86

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助】HPLC

最近在做一种药物,没有标准品,在3min左右出峰,色谱条件乙腈:水相=7:3,水相中有缓冲盐,我想请问的是这个峰是溶剂峰么?我的药用甲醇溶的,进了一针甲醇,发现没有吸收,问题在于,我将药物浓度提高一倍吸光度没有多大变化,在没有标准品的情况下怎么确定药物峰?
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漫步云端57

铁杆木虫 (文坛精英)


没有标品怎么确定啊啧个有点困难
2楼2010-12-22 10:18:55
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漫步云端57

铁杆木虫 (文坛精英)


既然进了空针没有那个应该是药物里的吧
3楼2010-12-22 10:19:37
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xuedan0628

木虫 (正式写手)



dream意(金币+1):谢谢 2010-12-22 21:49:22
进一针甲醇吧,应该会出溶剂峰的呀~~为什么不用甲醇做流动相或者用乙腈溶呢?
4楼2010-12-22 11:24:27
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kuangyw

金虫 (小有名气)


波长不对,或者色谱条件不对,没保留就冲出来了。
5楼2010-12-22 13:29:12
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蔓草箐扬

银虫 (小有名气)



dream意(金币+1):谢谢 2010-12-22 21:49:33
溶剂峰峰面积值一般不会很大,而且出峰时间应该是固定的,你改变流动相的比例看看峰保留时间变化不?还有一种方法就是可以改变一下检测器。
6楼2010-12-22 13:48:46
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ccyou

金虫 (小有名气)


你那个很可能是溶剂峰。你改变流动相比例,如果出峰时间有变化,说明不是溶剂峰。
7楼2010-12-22 14:30:09
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drugmen

金虫 (正式写手)


样品是什么?混合物还是单一化合物?极性情况呢?
溶剂峰出峰时间1——3分钟之间。

[ Last edited by drugmen on 2010-12-22 at 14:31 ]
8楼2010-12-22 14:30:47
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ahaoli_86

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by xuedan0628 at 2010-12-22 11:24:27:
进一针甲醇吧,应该会出溶剂峰的呀~~为什么不用甲醇做流动相或者用乙腈溶呢?

液相摸条件的时候首选的是乙腈做流动相,所以用的是乙腈,另外药物在甲醇中稳定,因此用的甲醇溶解。不过你的想法也对,我可以试试,谢谢!
9楼2010-12-22 14:46:43
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ahaoli_86

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by ccyou at 2010-12-22 14:30:09:
你那个很可能是溶剂峰。你改变流动相比例,如果出峰时间有变化,说明不是溶剂峰。

如果改变流动相的比例,出峰时间不变就可以确定是溶剂峰?这是原理呢?
10楼2010-12-22 14:48:00
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ahaoli_86

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 蔓草箐扬 at 2010-12-22 13:48:46:
溶剂峰峰面积值一般不会很大,而且出峰时间应该是固定的,你改变流动相的比例看看峰保留时间变化不?还有一种方法就是可以改变一下检测器。

我改变了流动相的比例,很大的那个峰时间和大小基本没变,进甲醇后发现可能是溶剂峰,但因检测波长在220nm以下,有末端吸收,进空白甲醇和流动相均能发现峰面积为5左右的小峰,这样影响测定么?还有药物在10ug/mL竟然A只有70,是不是有点小,可以定量么?
11楼2010-12-22 14:51:31
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蔓草箐扬

银虫 (小有名气)



dream意(金币+1):谢谢 2010-12-22 21:49:56
当样品紫外末端吸收时,你接着用紫外检测器本身就是一种挑战,有条件的话试一下示差检测器或是蒸发光散射检测器吧,你的样品如果属于糖类或是胺基类化合物时,我不建议你接着测。
12楼2010-12-22 18:53:32
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蔓草箐扬

银虫 (小有名气)


你测紫外时,最大吸收波长是多少?从你说的看来你这个样品对紫外的响应值不大呢,还有,你说的峰面积5左右的小峰,是什么峰,大约在哪个位置出呢?
13楼2010-12-22 19:02:15
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★ ★
dream意(金币+2):谢谢 2010-12-22 21:50:09
3min出峰不能说明什么问题,有可能是杂质峰,有可能是溶剂峰。
另外,乙腈、水作流动相,却用甲醇溶解,会有溶剂效应,建议用乙腈溶解样品或将样品浓缩增大浓度,并通过减少进样量来减少溶剂效应。

“将药物浓度提高一倍吸光度没有多大变化”这句不解,用的是紫外检测器吧?吸光度是一个固定值,为何会变化呢?峰面积么?一般来说,浓度提高,峰面积峰高等都会增大。
14楼2010-12-22 20:17:07
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峰面积70也太小了点,是新药吗?是新药的话,重新紫外扫描一下确定波长,或者更改检测器
15楼2010-12-22 22:11:15
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ahaoli_86

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 蔓草箐扬 at 2010-12-22 19:02:15:
你测紫外时,最大吸收波长是多少?从你说的看来你这个样品对紫外的响应值不大呢,还有,你说的峰面积5左右的小峰,是什么峰,大约在哪个位置出呢?

紫外扫谱最大吸收波长217nm,我用的100ug/mL,测的A0.8左右。进样纯甲醇,出现的小峰在5.5,6.5,8.5min也均有小峰。这个样品中应该有氨基,我不太清楚结构。纯乙腈进样,6.4,10.4min竟然也有小峰,照这种情况看,实验应该怎么进行下去?因为条件有限,没有其他的检测器,不想先考虑换仪器的问题。谢谢你!
16楼2010-12-23 10:39:50
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ahaoli_86

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 痴夷子皮 at 2010-12-22 20:17:07:
3min出峰不能说明什么问题,有可能是杂质峰,有可能是溶剂峰。
另外,乙腈、水作流动相,却用甲醇溶解,会有溶剂效应,建议用乙腈溶解样品或将样品浓缩增大浓度,并通过减少进样量来减少溶剂效应。

“将药物浓 ...

用的是紫外检测器,将样品浓度增大后,3,min出的峰,峰面积没有明显变化,经确定,应该是溶剂峰
17楼2010-12-23 10:42:30
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