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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】已有部分序列，如何获得全长？
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】已有部分序列，如何获得全长？ 已有6人参与

材料是梭菌，具体菌株型号未知。想得到一个功能基因的全长，但是现在只通过同源克隆得到了这个基因的中间一段，700多bp，而基因全长是1400左右。请问如何能得到它的全长呢？最近查了查，知道可以做RACE，但是有点贵哈，老板最近手头紧。再说提RNA也有点复杂。除了RACE，大家还有什么方法呢？高手指点啊！小女子谢谢啦！
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1楼 2010-12-21 10:55:03
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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引用回帖:
Originally posted by 梦想起飞 at 2010-12-21 14:15:38:

我也有此疑惑，可是要做RACE不是得先反转录吗？……呃……我也矛盾了……

我的意思是用不着做RACE，RACE难度相对来说比较大。RACE通常用来扩增真核基因的侧翼序列。你的材料是梭菌，是原核生物，不含有内含子，所以用不着用mRNA来做。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
12楼2010-12-21 16:25:28
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
好像大家都在用RACE
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2楼2010-12-21 11:11:37
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)
silicare:对于虫友的解答，你给一个表情是什么意思？？这样是对别人的帮助的不尊重 2010-12-21 11:46:16
引用回帖:
Originally posted by diaoyuhua at 2010-12-21 11:11:37:
好像大家都在用RACE

3楼2010-12-21 11:24:21
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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rainwander(金币+1):Tail-PCR不错，以前做过，但PCR结果也不太稳定 2010-12-21 14:18:18
引用回帖:
Originally posted by 梦想起飞 at 2010-12-21 10:55:03:
材料是梭菌，具体菌株型号未知。想得到一个功能基因的全长，但是现在只通过同源克隆得到了这个基因的中间一段，700多bp，而基因全长是1400左右。请问如何能得到它的全长呢？最近查了查，知道可以做RACE，但是有点 ...

梭菌是原核的，又不含内含子，你提RNA做什么啊。直接用TAIL-PCR或者 Clontech 的genome walking kit 就可以了。
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4楼2010-12-21 12:05:23
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