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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】小鼠各个器官的组织匀浆怎么制备
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yangsitao

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助】小鼠各个器官的组织匀浆怎么制备

想要做小鼠的药物组织分布，可是不知道该怎么制备各个器官的组织匀浆？
各位大侠能否给点具体的制备方法。就是这么怎么制备需要注意什么事项
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1楼 2010-12-16 18:25:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

王品三

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、取肝脏1g，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5或10ml的小烧杯内
2、用移液管量取0.86％冷生理盐水，生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织的小烧杯放入冰水中）。
3、手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
4、将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10～15分钟，若检测ATP酶，则只需要1000转/分，离心5分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。
根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种测定。
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12楼2012-06-15 14:56:49
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sjfovercom

金虫 (小有名气)
★
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-12-19 15:53:49
yangsitao(金币+2): 2010-12-20 11:07:19
我们以前做过小鼠脑，子宫的匀浆，是先加少许生理盐水到小号的匀浆器里。然后在冰水浴里操作，动作要轻柔。用滴管取出匀浆液，离心取上清。
注意:1.组织会贴在匀浆器的壁上，所以制备的时候要观察是否匀浆器里还有剩余组织。2.冰水浴很重要，保证组织里面的成分不流失，测指标好点。3.匀浆操作要轻柔，会产生泡沫。4.加少许生理盐水不能太多，要不然不好操作。还有些注意点自己小心操作就可以。
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7楼2010-12-17 09:51:51
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yll120166

木虫 (正式写手)
★
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-12-19 15:53:55
yangsitao(金币+2): 2010-12-20 11:07:02
yangsitao(金币+1): 2010-12-22 19:24:03
我做过大鼠的组织分布，我们是按0.5g组织：1ml生理盐水，像组织比较少的（少于0.5g）就加0.5ml生理盐水，在10ml的EP管里匀浆，用的电动匀浆器。如果手动的话一个是太慢，一个是损失多，要是样本多时间长也怕样品不稳定。所以电动的还是好些，几个人配合一起，有切的，有称重加生理盐水的和匀浆的。我们有时候样多，一匀就是一天。
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8楼2010-12-17 20:36:52
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880110sj

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一般现在都是用超声匀浆，应该在冰上进行
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11楼2011-04-30 15:12:52
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普通回帖

wld200106

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2010-12-16 18:48:30
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yll120166

木虫 (正式写手)
★
karl2100(金币+1):谢谢回帖！ 2010-12-16 22:21:45
yangsitao(金币+2):可不可具体点，我从来没做过，比如具体步骤什么来的， 2010-12-16 22:30:53
按一定的比例加生理盐水，用组织匀浆机制备匀浆，具体比例自己根据试验定。
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3楼2010-12-16 19:24:45
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点点爱滴滴

金虫 (正式写手)
大学实验基本上都是用玻璃匀浆器进行匀浆的
不知道有没有误差
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4楼2010-12-16 23:44:57
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
★
dream意(金币+1):谢谢回帖交流 2011-01-04 17:43:42
用组织匀浆机吧，然后自己摸条件提取组织样品（如蛋白沉淀或液液萃取等），然后进仪器测定。
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5楼2010-12-17 00:07:07
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lihuiljj

禁虫 (小有名气)
yangsitao(金币+2): 2010-12-20 11:07:40
本帖内容被屏蔽
6楼2010-12-17 08:56:33
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lavender169

木虫 (正式写手)
★ ★
dream意(金币+2):谢谢回帖交流 2011-01-04 17:43:54
做蛋白的话  就要求有裂解液（ripa）和蛋白酶抑制剂（PMSF或者cocktail） 首先加入预冷的裂解液和蛋白酶抑制剂 然后去小块组织放入玻璃匀浆器中，匀浆30min 动作轻柔 要不好多气泡 操作过程在冰上进行。
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9楼2011-01-04 12:58:11
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richfish

禁虫 (小有名气)
★
karl2100(金币+1):谢谢参与讨论！ 2011-01-09 20:32:38
本帖内容被屏蔽
10楼2011-01-09 19:29:27
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tq冉

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by richfish at 2011-01-09 19:29:27
建议找台匀浆机，手工匀浆缺陷很多。这不光是速度的问题，还有待测化合物在组织中是否稳定的问题。
可以用生理盐水做为匀浆液，也可以用1:1的甲醇水作为匀浆液。假如仅仅是做样品分析，建议用甲醇水。

您好，请问您说的甲醇水是甲醇生理盐水还是甲醇超纯水？
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13楼2016-11-07 22:05:58
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