谢谢大家的帮助！

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11楼2010-12-14 08:31:31

liuquan7180

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梯度洗脱就是这样的，空白只要能够重叠，对分析没有干扰就可以了
如果对分析有干扰就改变下梯度条件就可

12楼2010-12-14 08:50:13

guo_yu_qian

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谢谢大家的帮助！

我已经排除的可能有：
1、流动相配制全部是用新的试剂，不存在被污染的问题；
2、岛津的LC-20A是新来的仪器，管路用各种浓度的乙腈冲洗过，而且做其他实验走梯度没有发生类似问题；
3、实验前排气，清洗针头都做了；
4、我的梯度是：0-40分乙腈从2%-30%，40-70分乙腈从30%-50%，70-80分乙腈维持在%50，80-85分乙腈从50%-2%，乙腈2%维持10分结束。
5、在50分左右有个尖峰，不像是梯度峰，连续进空白，结果基本一致。
6、会是柱子的问题吗？我用的两个不同填料的C18柱。有不同但都有类似情况，感觉方法太敏锐了。

13楼2010-12-14 13:42:48

嘉木

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系统被污染或者流动相被污染

14楼2010-12-14 16:30:54

huangzhewen

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没具体的方法，比如色谱柱，流动相比例和梯度，仪器，图谱，不太好说，但是建议从仪器，柱子和流动相和溶剂都排除一下。
仪器的检测器是否有污染？
彻底的清洗一次柱子，根据柱子类型，极性柱可以用一定比例的如四氢呋喃进行冲洗；
低波长的干扰会比较大，如果仪器可以的话可以选择一个参比波长；
也可以微调一下流动相的水相起始比例，看看图谱的变化趋势；

等等

如果证实就是溶剂峰，而且也不干扰目标峰，就接受他吧

15楼2010-12-14 22:42:37

huangzhewen

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c18的柱子，推荐使用的最低有机相比例是5%，这个检测方法比较伤柱子，
可以进个空针，排除一下进样系统是否有污染；
如果进样瓶或者过滤器不是一次性使用的也考虑一下污染；
再就是换其他的仪器做一下，看看是否也是这种情况

希望你能早点找到原因

16楼2010-12-14 23:00:03

asd123xukun

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流动相不干净，之前我也和你是一种情况，后面把所有因素都排查过去，最后发现是水的问题

17楼2011-02-20 07:48:39

iamiwjy

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请问该问题最终如何解决掉的呢？

廷，执我之手，敛我半世癫狂；廷，吻我之眸，遮我半世流离。

18楼2013-06-16 14:02:25

guo_yu_qian

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引用回帖:

18楼: Originally posted by iamiwjy at 2013-06-16 14:02:25
请问该问题最终如何解决掉的呢？

最终只有换流动相系统了，我自己推测的原因有两个：一是缓冲盐浓度过高，跟乙腈在混合走梯度时，流动相系统不稳定；二是水跟色谱乙腈有一个或者同时都不纯，在215nm走梯度情况下会出现杂质峰。

19楼2013-06-17 14:34:35

iamiwjy

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引用回帖:

19楼: Originally posted by guo_yu_qian at 2013-06-17 14:34:35
最终只有换流动相系统了，我自己推测的原因有两个：一是缓冲盐浓度过高，跟乙腈在混合走梯度时，流动相系统不稳定；二是水跟色谱乙腈有一个或者同时都不纯，在215nm走梯度情况下会出现杂质峰。...

唉，那你换成什么系统了呀？最终没有那个峰了么？我的是磷酸盐，才0.01M，也大么？

廷，执我之手，敛我半世癫狂；廷，吻我之眸，遮我半世流离。

20楼2013-06-22 10:36:12