【求助/交流】分离培养后如何判断是纯菌？ - 微生物 - 综合其他

11楼2010-12-19 19:02:42

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ycj0746

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Originally posted by hampc at 2010-12-12 20:48:35:
转种于血平板上及其他选择性培养基上，从菌落形态上一般能看出来，最好的办法是接种到显色培养基上，就更明显了。

单凭形态观察是很主观的方法，不够严谨，显色培养基也是观察形态，另外就是不是每种菌都具有相应的显色培养基。

12楼2010-12-19 19:05:38

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Originally posted by 鬼豆虫 at 2010-12-12 21:21:53:
镜检呀。一般都镜检。镜检就很准了。

一点也不准，真的，很主观的说，很多菌的形态差别细微用镜检是根本检测不出来的，但是在序列及生物学功能上却差别很大的。

13楼2010-12-19 19:07:30

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xuanxuankaoyan

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Originally posted by ycj0746 at 2010-12-19 18:58:26:

如何看？ PCR扩出来的都是相同长度的片段，琼脂糖胶上反映出来的都是同一个位置，只有在测序的时候才能显示纯或者不纯。

可以适当的稀释菌液，ＰＣＲ，测序。

14楼2010-12-19 19:41:07

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ycj0746

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Originally posted by xuanxuankaoyan at 2010-12-19 19:41:07:

可以适当的稀释菌液，ＰＣＲ，测序。

我的理解应该是不稀释，直接取菌液原样PCR，然后测序，得到序列结果才能算纯。这里PCR扩增的应该是16S的全长吧，而不失其中部分片段的序列结果。PCR然后测序才能得到纯或不纯的结果，如果不纯，那么还得反复纯化再次PCR，然后再送检，挺耗费时间的。

15楼2010-12-19 19:51:49

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0050910002

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尽量挑单菌落，跑的PCR预配液尽量保证不被污染

Neversaygoodbye

16楼2010-12-19 19:53:21

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Originally posted by 0050910002 at 2010-12-19 19:53:21:
尽量挑单菌落，跑的PCR预配液尽量保证不被污染

我当然也是这么做，但是很多情况下，测序的结果常常不尽如人意。

17楼2010-12-19 19:58:36

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xuanxuankaoyan

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Originally posted by ycj0746 at 2010-12-19 19:51:49:

我的理解应该是不稀释，直接取菌液原样PCR，然后测序，得到序列结果才能算纯。这里PCR扩增的应该是16S的全长吧，而不失其中部分片段的序列结果。PCR然后测序才能得到纯或不纯的结果，如果不纯，那么还得反复 ...

错，PCR的灵敏度很高，模板稀释了，可以提高特异性，相对得到纯的结果

18楼2010-12-19 20:11:46

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Originally posted by xuanxuankaoyan at 2010-12-19 20:11:46:

错，PCR的灵敏度很高，模板稀释了，可以提高特异性，相对得到纯的结果

呵呵，我不明白你说的错是指什么错了？我的意思是菌液（原样）如果是纯的，那么就没有必要稀释，如果稀释后再PCR，即使PCR能测出序来，也只能证明你稀释后的菌液是纯的，但是对于未稀释的菌液（原样）则不一定纯，对吧？PCR的灵敏性当然很好，对于这点我不怀疑。

19楼2010-12-19 20:18:50

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Originally posted by ycj0746 at 2010-12-19 20:18:50:

呵呵，我不明白你说的错是指什么错了？我的意思是菌液（原样）如果是纯的，那么就没有必要稀释，如果稀释后再PCR，即使PCR能测出序来，也只能证明你稀释后的菌液是纯的，但是对于未稀释的菌液（原样）则不一定纯 ...

我的目的是解决你测序不纯的问题。你也想得到很好的结果不是。如果设置重复，稀释的菌液是纯的，那可以肯定原样也应该是纯的。