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ycj0746

银虫 (小有名气)

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Originally posted by 柚柚海风 at 2010-12-12 20:17:31:
我们一般都是镜检  呵呵 测序还没有上呢

镜检很主观的,即使形态一致也并不能说明已经纯了。
11楼2010-12-19 19:02:42
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ycj0746

银虫 (小有名气)

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Originally posted by hampc at 2010-12-12 20:48:35:
转种于血平板上及其他选择性培养基上,从菌落形态上一般能看出来,最好的办法是接种到显色培养基上,就更明显了。

单凭形态观察是很主观的方法,不够严谨,显色培养基也是观察形态,另外就是不是每种菌都具有相应的显色培养基。
12楼2010-12-19 19:05:38
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ycj0746

银虫 (小有名气)

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Originally posted by 鬼豆虫 at 2010-12-12 21:21:53:
镜检呀。 一般都镜检。 镜检就很准了。

一点也不准,真的,很主观的说,很多菌的形态差别细微用镜检是根本检测不出来的,但是在序列及生物学功能上却差别很大的。
13楼2010-12-19 19:07:30
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xuanxuankaoyan

至尊木虫 (知名作家)


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Originally posted by ycj0746 at 2010-12-19 18:58:26:


如何看? PCR扩出来的都是相同长度的片段,琼脂糖胶上反映出来的都是同一个位置,只有在测序的时候才能显示纯或者不纯。

可以适当的稀释菌液,PCR,测序。
14楼2010-12-19 19:41:07
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ycj0746

银虫 (小有名气)

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Originally posted by xuanxuankaoyan at 2010-12-19 19:41:07:

可以适当的稀释菌液,PCR,测序。

我的理解应该是不稀释,直接取菌液原样PCR,然后测序,得到序列结果才能算纯。这里PCR扩增的应该是16S的全长吧,而不失其中部分片段的序列结果。PCR然后测序才能得到纯或不纯的结果,如果不纯,那么还得反复纯化再次PCR,然后再送检,挺耗费时间的。
15楼2010-12-19 19:51:49
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0050910002

木虫 (正式写手)


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尽量挑单菌落,跑的PCR预配液尽量保证不被污染
Neversaygoodbye
16楼2010-12-19 19:53:21
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ycj0746

银虫 (小有名气)

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Originally posted by 0050910002 at 2010-12-19 19:53:21:
尽量挑单菌落,跑的PCR预配液尽量保证不被污染

我当然也是这么做,但是很多情况下,测序的结果常常不尽如人意。
17楼2010-12-19 19:58:36
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xuanxuankaoyan

至尊木虫 (知名作家)


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Originally posted by ycj0746 at 2010-12-19 19:51:49:


我的理解应该是不稀释,直接取菌液原样PCR,然后测序,得到序列结果才能算纯。这里PCR扩增的应该是16S的全长吧,而不失其中部分片段的序列结果。PCR然后测序才能得到纯或不纯的结果,如果不纯,那么还得反复 ...

错,PCR的灵敏度很高,模板稀释了,可以提高特异性,相对得到纯的结果
18楼2010-12-19 20:11:46
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ycj0746

银虫 (小有名气)

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Originally posted by xuanxuankaoyan at 2010-12-19 20:11:46:

错,PCR的灵敏度很高,模板稀释了,可以提高特异性,相对得到纯的结果

呵呵,我不明白你说的错是指什么错了?我的意思是菌液(原样)如果是纯的,那么就没有必要稀释,如果稀释后再PCR,即使PCR能测出序来,也只能证明你稀释后的菌液是纯的,但是对于未稀释的菌液(原样)则不一定纯,对吧?PCR的灵敏性当然很好,对于这点我不怀疑。
19楼2010-12-19 20:18:50
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xuanxuankaoyan

至尊木虫 (知名作家)


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Originally posted by ycj0746 at 2010-12-19 20:18:50:

呵呵,我不明白你说的错是指什么错了?我的意思是菌液(原样)如果是纯的,那么就没有必要稀释,如果稀释后再PCR,即使PCR能测出序来,也只能证明你稀释后的菌液是纯的,但是对于未稀释的菌液(原样)则不一定纯 ...

我的目的是解决你测序不纯的问题。你也想得到很好的结果不是。如果设置重复,稀释的菌液是纯的,那可以肯定原样也应该是纯的。
20楼2010-12-19 20:34:14
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