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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by guoxingjun2008 at 2010-12-10 11:58:40:
非特异性扩增太多了,估计引物需要重新设计,另外建议退火温度做个梯度,看看哪个温度比较合适!

已经是梯度了,从左至右45-65度
21楼2010-12-10 13:22:40
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用这个引物P另外两种物种获得的条带是多大呢?貌似MAKER 2-3之间那个带比较像ACTIN.呵呵。
22楼2010-12-10 14:23:21
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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by piaopiao233 at 2010-12-10 11:39:19:
还要再问一句,你用的什么酶啊,高保真的?

显色剂是EB,宝生物的普通PCR rTaq酶,并非高保真
23楼2010-12-10 14:52:18
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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-12-10 09:52:18:
杂带不是问题,关键是这些杂带中有没有和目的片段大小一致的条带???

呵呵,目的片段是4kb左右,这里没有啊,汗那
24楼2010-12-10 14:58:50
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
鱼类和乌贼亲缘关系太远了,所以楼主无法获得目的条带,我想这是主要原因,乌贼是软体动物,楼主甚至应该考虑用贝类的基因,都不应该考虑用鱼类的,我给点建议,查一下太平洋牡蛎、鲍等,是否有测序的beta-actin。你目前的引物还是放弃吧,扩出来的带,显然不可能是目的条带,筛选温度和touch-down都是浪费时间
25楼2010-12-10 21:29:18
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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-12-10 21:29:18:
鱼类和乌贼亲缘关系太远了,所以楼主无法获得目的条带,我想这是主要原因,乌贼是软体动物,楼主甚至应该考虑用贝类的基因,都不应该考虑用鱼类的,我给点建议,查一下太平洋牡蛎、鲍等,是否有测序的beta-actin。 ...

多谢多谢,我会去查查!
26楼2010-12-10 21:43:37
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keqindeng

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
影响pcr的因素包括pcr仪器,Taq酶,引物,模板,一个个排除吧。
另外建议生物实验最好同时做阴性,阳性对照,出了问题能马上找到原因。
27楼2010-12-11 00:49:47
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lwzxl007

木虫 (小有名气)

不懂,顶了
28楼2010-12-25 21:57:43
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jerry110

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这是pcr结果啊?怎么咋一看像是marker,呵呵
29楼2010-12-26 10:02:59
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水滴娃娃

铁虫 (初入文坛)

绝对是引物的问题
30楼2010-12-26 10:10:46
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