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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大鼠组织的WB
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大鼠组织的WB

请教下各位，获得大鼠组织怎么做WB好呢，一般使用的蛋白酶抑制剂有哪些呢？哪些效果是比较好的。组织如何分离提取做WB呢？

[ Last edited by dianaofyezi on 2010-12-10 at 20:30 ]
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1楼 2010-12-07 08:42:46
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4599520

金虫 (小有名气)
★
dianaofyezi(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
6楼: Originally posted by mourning at 2010-12-10 23:09:17
我们是新鲜组织直接扔液氮里，用灭菌的陶瓷研磨磨碎组织，加细胞裂解液和蛋白酶抑制剂入cocktail等，再超声，震荡，离心取上清加LB煮了即可

请问您做过大鼠胰腺组织的WB么？蛋白提取方法和其他组织是一样的么？
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10楼2014-04-24 21:17:24
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rivers_123

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5):鼓励新虫交流 2010-12-10 14:32:54
dianaofyezi(金币+1):谢谢你的参与！ 2010-12-10 20:31:00
匀浆，离心，然后WB就行啦
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2楼2010-12-10 14:11:26
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rivers_123 at 2010-12-10 14:11:26:
匀浆，离心，然后WB就行啦

我想咨询下，这个WB对组织块的大小或者质量是否有要求呢？
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3楼2010-12-10 17:57:07
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dianaofyezi(金币+1):谢谢您的信息。非常有用。 2010-12-10 20:31:20
可以使用上海生工的全蛋白提取试剂盒


全蛋白提取试剂盒
Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit       
产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down,EMSA等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107个培养细胞或200mg动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以使用50次。储存条件：2～8℃。
产品特点：
1．提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性；
2．整个操作过程只需要30分钟左右；
3．即可以用于培养细胞（50x107个），有可以用于动物组织（50x200mg）蛋白质的提取；
4．避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性；
5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
编号        包装        价格        产地
BSP003        50 Assays        520        生工
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4楼2010-12-10 18:48:02
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