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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】大肠杆菌菌液，如何再扩增？
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lwd19831217

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):辛苦 早睡 2010-12-09 00:40:59
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-12-08 21:51:20:

加等体积30%甘油，-70冻就是了
其实2mL提的质粒很多了，基本上够用了。实验顺利的话，这个冻存的菌基本上不会再用到了

我们也几乎是和他们一样的。但我们的样非常多，就换了种做法：直接用的96孔深孔板摇菌，2ML容积的深孔板装500至800培养基，盖那种透气的parafilm膜（固定好容易翘起来），在摇床上固定住摇，培养好后直接用排枪转移80微升到预加同样体积30%甘油的96孔板里进冰箱保存，剩下的转至96孔板直接离心（据说有能直接离深孔板的转子可惜现有的只能离96孔板），沉淀用水重悬，略补些吐温混合后直接加到扩增体系中，就去扩了（沉淀亦可加裂解液直接跑电泳检测质粒的）。一批就是96个，仪器允许的条件下一天可以检测许多样。
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11楼2010-12-09 00:39:24
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lwd19831217

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lwfangel at 2010-12-06 14:06:57:
用大肠杆菌做克隆，挑好白色单菌落之后，放到1mlAmp抗性的LB培养基中，摇菌，浑浊后做菌液PCR。对于有克隆产物的菌液，我怎样才能得到更多的菌液呢？

我想将有克隆产物的菌液吸取10ul，加到1mlAmp抗性的LB培养 ...

如果你第一次菌培养时间过长了，培养基可能酸化等会导致氨卞失效，引起质粒丢失等，后面培养后再扩有可能就扩不出来了。两次电泳结果的区别不知为嘛，通常情况下pcr产物不可能降解这么快的
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12楼2010-12-09 00:50:20
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
615234楼: Originally posted by ben1147 at 2010-12-06 14:14:10
在无污染的情况下是可以用菌液继续培养的
保险起见还是先用菌液划线或者稀释之后涂板子挑单克隆再摇
菌落PCR一般都是假阳性多，假阴性很少见到。是不是菌沉下去了，吸上清里没多少菌所以P不出来？
PCR产物不应该 ...

请问，用AMP平板筛选出的单菌落，PCR检测并划线，是应该继续划在含AMP还是不含AMP的LB平板上
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13楼2012-08-12 10:08:23
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ben1147

木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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1975329楼: Originally posted by 不鸣鸟 at 2012-08-12 10:08:23
请问，用AMP平板筛选出的单菌落，PCR检测并划线，是应该继续划在含AMP还是不含AMP的LB平板上...

没有特殊要求的话，当然要保持选择压
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14楼2012-08-13 09:13:54
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