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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】真核细胞总蛋白抽提
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zplipeng

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】真核细胞总蛋白抽提

各位高人：
    目前正在做真核细胞的表达。用GFP质粒表达的预实验表明整个转染及表达系统是没有问题的，但是自己研究的质粒转染后，却在上清中检测不到表达蛋白。初步推测有可能是信号肽不灵光，导致没有外分泌到上清中。
    于是想裂解一下293T细胞看是否在胞内有表达，但是很难找到细胞裂解及抽提蛋白的溶液及步骤的资料，望各位高人指点，贡献自己的方法及详细步骤，配方。。。。谢过了先。。。


自己找的配方：
Tris-HCl(pH8.0)   50 mmol/L
NaCl                   150mmol/L
NaN3                  0.02%
PMSF                  100ug/mL
Aprotinin             1ug/mL
TritonX-100         1%

使用前冰上预冷，加入裂解缓冲液后，冰浴20min。
刮取细胞裂解物，加入离心管中，4℃离心2min
取上清，测定值。。。。

[ Last edited by zplipeng on 2010-12-2 at 09:01 ]
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1楼 2010-11-30 12:26:08
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taotao4108

金虫 (正式写手)
zplipeng(金币+3):多谢多谢。。。。 2010-12-02 08:57:14
真核蛋白抽提有专业的试剂盒，比如伯乐之类，都有
当然，你也可以自己配置，真核蛋白抽提裂解液的配方很多，具体可以参考双向电泳的真核蛋白裂解液
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2楼2010-11-30 12:55:25
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