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zplipeng

金虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】真核细胞总蛋白抽提

各位高人：
目前正在做真核细胞的表达。用GFP质粒表达的预实验表明整个转染及表达系统是没有问题的，但是自己研究的质粒转染后，却在上清中检测不到表达蛋白。初步推测有可能是信号肽不灵光，导致没有外分泌到上清中。
于是想裂解一下293T细胞看是否在胞内有表达，但是很难找到细胞裂解及抽提蛋白的溶液及步骤的资料，望各位高人指点，贡献自己的方法及详细步骤，配方。。。。谢过了先。。。

自己找的配方：
Tris-HCl(pH8.0) 50 mmol/L
NaCl                150mmol/L
NaN3                0.02%
PMSF                100ug/mL
Aprotinin          1ug/mL
TritonX-100       1%

使用前冰上预冷，加入裂解缓冲液后，冰浴20min。
刮取细胞裂解物，加入离心管中，4℃离心2min
取上清，测定值。。。。

[ Last edited by zplipeng on 2010-12-2 at 09:01 ]

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1楼 2010-11-30 12:26:08

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