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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】激光共聚焦显微镜观察蓝藻中钙离子的分布用什么钙离子指示剂好呀？
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zhaohui-eric

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】激光共聚焦显微镜观察蓝藻中钙离子的分布用什么钙离子指示剂好呀？

激光共聚焦显微镜观察蓝藻中钙离子的分布用什么钙离子指示剂好呀？蓝藻中有叶绿体，本身它就是发红光的，如在蓝藻中加入钙离子指示剂Fluo-3/AM的话，钙离子与指示剂结合会发出绿光，但由于有叶绿素荧光的影响，使钙离子的定位及定量反而不好做了，求各位专家给予指导！
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1楼2010-11-29 10:54:10
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zhaohui-eric

木虫 (著名写手)

请问怎么做？

引用回帖:
Originally posted by boouy at 2010-11-30 03:42:22:


叶绿体荧光应该不是问题，好像可以分辨出来并过滤掉。

我们找一位实验人员给做的，好像她不太会做，能否给指点一下，我们对仪器很不懂，能否计算胞内钙离子量，也就是定量分析，谢谢了
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3楼2010-11-30 09:06:40
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boouy

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
zhaohui-eric(金币+1): 2010-12-02 10:14:30
引用回帖:
Originally posted by zhaohui-eric at 2010-11-29 10:54:10:
激光共聚焦显微镜观察蓝藻中钙离子的分布用什么钙离子指示剂好呀？蓝藻中有叶绿体，本身它就是发红光的，如在蓝藻中加入钙离子指示剂Fluo-3/AM的话，钙离子与指示剂结合会发出绿光，但由于有叶绿素荧光的影响，使 ...

叶绿体荧光应该不是问题，好像可以分辨出来并过滤掉。
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2楼2010-11-30 03:42:22
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boouy

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
zhaohui-eric(金币+2): 2010-12-02 10:14:43
引用回帖:
Originally posted by zhaohui-eric at 2010-11-30 09:06:40:



我们找一位实验人员给做的，好像她不太会做，能否给指点一下，我们对仪器很不懂，能否计算胞内钙离子量，也就是定量分析，谢谢了

有段时间没用过了，记得要用multi-track，不过肯定能有效分开。但关于钙的测定则没有概念了，我也对这个感兴趣，欢迎高手回帖。
看看这个链接的图片就可以看出来差别还是很大的：
http://www.rsbs.anu.edu.au/profi ... mages/Perox-GFP.htm
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4楼2010-12-01 12:37:16
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mumahuanhun

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
zhaohui-eric(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-31 08:29:18
个人觉得叶绿体发出的波段和Fluo3结合Ca后重叠应该很少，所以串色影响不大；Fluo4的效率要比Fluo3高一倍，荧光会更强，据说现在又出了Fluo8，效率更高。

但是这一类都不适合做定量，只能半定量看荧光强度的变化。

最好是Fura2 ratio法测钙，还可以计算出Ca离子浓度，是定量的方法。
如果有双光子，也可以使用Indo-1探针做。
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5楼2014-03-30 21:49:31
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