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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题
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maxwell1988

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题 已有11人参与

最近刚做了酶切、连接，基因是~0.5kb左右，载体是~5kb左右，连接产物转化后做了菌落PCR，PCR产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定了一下。发现出现了很亮的条带，但本人不确定是不是就是我想要的重组质粒。所以，想问各位大侠们，这种基因和载体连接后的质粒大小大概是多少？
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perfectpig向前冲！别犹豫！
1楼 2010-11-22 15:08:32
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piaopiao233

金虫 (小有名气)
★
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环状质粒是会跑的快一点
特别是如果你的胶不能跑环状质粒，那么大小肯定不在5500左右

所以，一般我们都会切一刀，单酶切验证一下，这样比较正确。
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11楼2010-11-24 14:03:45
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maxwell1988

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by violet.zhou at 2010-11-22 15:16:12:
5.5Kb呗。。。。

目的片段与载体连接后是一种环化结构，这不能通过简单的相加得出结论的吧？
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perfectpig向前冲！别犹豫！
3楼2010-11-22 15:26:20
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水滴娃娃

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 11:09:22
在插入片段两端设计下引物，测个序，若有插入片段的序列 就重组成功，就可以用这次的样品当Marker了，呵呵。。。
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4楼2010-11-22 15:40:13
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by maxwell1988 at 2010-11-22 15:26:20:

目的片段与载体连接后是一种环化结构，这不能通过简单的相加得出结论的吧？

环化结构不影响实际的大小啊，不过就是跑胶时候从条带来分析，约是0.8倍的大小。
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5楼2010-11-23 09:22:45
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