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【求助/交流】ATP酶活性测定问题
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实验过程是这样的： 取已配制好的叶绿体悬浮液1ml，加入1ml激活液，20℃保温10min，加牛血清蛋白（10mg/ml）0.1ml停止激活。摇匀后64℃水浴中保温4min。冷却后，取三只试管分别取0.5ml上述酶液，各加0.5ml反应液，其中2支试管37℃保温10min，另一支置冰浴中做空白对照。 三只试管各加入0.1ml 20%三氯乙酸停止反应，然后3000rad/min离心5min。取上清液0.5ml加入蒸馏水2.5ml，2ml硫酸盐亚铁钼酸铵，摇匀后放置30min，显色稳定后在660nm波长下测定吸光度。 结果计算中 叶绿体ATP酶活力[μmolPi/mgChl•h)]= μMPi× （V/V1） × (1000/叶绿素含量) ×（60/t） 上式中：μMPi为所测得的光密度从标准曲线上查得的无机磷量； V为反应体积； V1为取样测定的体积； 因叶绿素的量以μg表示，故×1000变为mg； t为反应时间。 我现在不知道V,V1,t，各应该是多少。 感谢各位帮忙 |
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